醫(yī)學(xué)碩士論文開題報(bào)告范例
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醫(yī)學(xué)碩士論文開題報(bào)告范例
一、立題依據(jù)(科學(xué)意義及國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀分析及參考文獻(xiàn))
惡性黑色素瘤是一種高度惡性且最具侵襲性的癌之一,多發(fā)生于皮膚,早期發(fā)生血行轉(zhuǎn)移。對(duì)放、化療不敏感,在世界范圍內(nèi)發(fā)病率增高,人們一直在期待著可以征服惡性黑素瘤的新的療法的出現(xiàn)!
最近大量的數(shù)據(jù)表明惡性腫瘤的發(fā)展與T-鈣粘蛋白的表達(dá)變化相關(guān).T-鈣粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌[1-3] 、胃癌、胰腺癌、卵巢癌[4-9]等多種惡性腫瘤中被檢測(cè)到表達(dá)減少.最近的研究表明T/H—鈣粘蛋白在乳腺癌中的重新表達(dá)能抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),降低體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的`侵襲潛能[1].T/H—鈣粘蛋白這個(gè)新型鈣粘蛋白分子在人類許多癌細(xì)胞中表達(dá)都降低表明它或許在腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[10]及維持正常細(xì)胞的表型中起重要作用[11].
T/H—鈣粘蛋白與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的聯(lián)系,也許它會(huì)為腫瘤的診斷和治療帶來新的契機(jī).
T-鈣粘蛋白是否對(duì)惡性黑色素瘤也有作用,目前還沒有相關(guān)研究的報(bào)道,所以本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)行相關(guān)方面的探討性研究!
二、研究?jī)?nèi)容及預(yù)期成果(說明具體研究?jī)?nèi)容、創(chuàng)新點(diǎn)及擬解決的關(guān)鍵問題、預(yù)期成果及提供形式)
研究?jī)?nèi)容:
第一部分:正常表皮組織、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中T-cadherin表達(dá)情況
第二部分 T-cadherin基因克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建
第三部分:T-cadherin基因的真核表達(dá)及生物活性分析
創(chuàng)新點(diǎn):首次將T-cadherin基因轉(zhuǎn)染黑素瘤細(xì)胞
擬解決的關(guān)鍵問題:通過RT-PCR反應(yīng)擴(kuò)增出T-cadherin的基因全長(zhǎng)。
預(yù)期成果及提供形式:
觀察T-鈣粘蛋白在正常皮膚組織細(xì)胞、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況!
進(jìn)一步闡明T-鈣粘蛋白作用機(jī)制
T-鈣粘蛋白基因轉(zhuǎn)染入黑色素瘤細(xì)胞后觀察對(duì)其增殖和轉(zhuǎn)移活性的抑制情況,探索臨床診斷和治療黑色素瘤及其它腫瘤的方法!
三、研究方案(包括研究方法、技術(shù)路線、研究進(jìn)度安排)
研究方法:
第一部分:正常表皮組織、痣細(xì)胞及黑色素瘤細(xì)胞中T-cadherin表達(dá)情況
免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)
1.材料:從正常人皮膚切取的痣組織,人黑色素瘤細(xì)胞株
2.主要試劑和溶液
(1)第一抗體:兔抗人T-cadherin 抗體
(2)第二抗體:生物素標(biāo)記羊抗兔IgG
(3) “三抗” :鏈親和霉素標(biāo)記HRP
3.設(shè)備
4.方法
(1)冷凍切片的免疫染色程序
(2)活細(xì)胞的免疫染色程序
5.熒光顯微鏡檢
注意:為保證結(jié)果的可靠性應(yīng)該同時(shí)設(shè)有對(duì)照
陽(yáng)性對(duì)照(正常組織) ;
陰性對(duì)照(PBS代替一抗)以證明抗體的特異性。
第二部分 T-cadherin基因克隆和真核表達(dá)載體的構(gòu)建
1.材料:
(1)組織和細(xì)胞
(2)菌株與質(zhì)粒
(3)工具酶
(4)試劑
(5)儀器
2.方法
(1)引物的設(shè)計(jì)
(2)總RNA的提取:異硫氰酸胍-酚-氯仿抽提一步法
(3)甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳分析其質(zhì)量,觀察所提RNA有無(wú)明顯降解;
(4)逆轉(zhuǎn)錄RT反應(yīng) :為了證實(shí)RT反應(yīng)的成功設(shè)管家基因GAPDH為內(nèi)對(duì)照
(5)PCR擴(kuò)增 :利用上下游引物,在DNA聚合酶下對(duì)目的片段進(jìn)行擴(kuò)增,PCR過程設(shè)β-actin為內(nèi)對(duì)照
(6)PCR產(chǎn)物的回收、純化
(7)PCR產(chǎn)物的克隆
(8)DNA序列測(cè)定
(9)真核重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
(10)陽(yáng)性重組質(zhì)粒的鑒定和篩選
(11)質(zhì)粒的大量提取
(12)轉(zhuǎn)染黑色素瘤細(xì)胞
第三部分:T-鈣粘蛋白基因的真核表達(dá)及生物活性分析
1.材料
2.方法
(1)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)
(2) Western印跡法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后蛋白的表達(dá)
(3)流式細(xì)胞周期分析
(4)凋亡的檢測(cè)
技術(shù)路線圖:
研究進(jìn)度安排:
2004.9——2005.7 學(xué)習(xí)學(xué)位課程,查閱文獻(xiàn),完成課題設(shè)計(jì)
2005.9——2006.9 基本完成實(shí)驗(yàn)研究工作
2006.10——2007.3 完成實(shí)驗(yàn)補(bǔ)遺工作并 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,撰寫論文
2007.4——2007.6 論文答辯
四、經(jīng)費(fèi)預(yù)算
試劑費(fèi)用: 15000 元<
BR>組織及細(xì)胞: 1000 元
文獻(xiàn)資料費(fèi): 500 元
論文打印費(fèi): 1000 元
答辯費(fèi): 1500 元
總計(jì): 19000元
五、課題可行性分析
實(shí)驗(yàn)在導(dǎo)師的指導(dǎo)下進(jìn)行,http://www.51lunwen.com/shuoshikait/導(dǎo)師段昕所教授、主任醫(yī)師對(duì)黑色素瘤的診斷治療、檢測(cè)方法和研究進(jìn)展有深入的了解,對(duì)本課題的研究設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)有重要的指導(dǎo)意義。
已完成黑色素瘤及T-鈣粘蛋白研究最新進(jìn)展的文獻(xiàn)檢索和綜述報(bào)告工作。
所有實(shí)驗(yàn)均在承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院皮膚病研究室和中心實(shí)驗(yàn)室完成。實(shí)驗(yàn)室的老師實(shí)驗(yàn)技術(shù)熟練,在細(xì)胞培養(yǎng)、免疫組化及分子生物學(xué)等方面都可給予指導(dǎo);實(shí)驗(yàn)所需的科研儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)室均具備。
參考文獻(xiàn):
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11. Lee SW.,Reimercl.,Campbell DB.,et al 1998Jun;19(6):1157-9
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