香連素片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究論文
香連素片是廣東萬(wàn)年青制藥有限公司的產(chǎn)品，具有清熱燥濕、行氣止痛的功效，臨床用于濕熱型痢疾、里急后重、腹痛泄瀉。下面是小編為大家整理的香連素片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究論文，歡迎參考~
香連素片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究論文
【摘要】 目的 建立香連素片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法鑒別香連素片中的木香;采用高效液相色譜法測(cè)定香連素片中鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果 在薄層色譜中檢出了木香;鹽酸小檗堿的進(jìn)樣量在0.0378～0.378 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 7)，平均回收率為101.49%，RSD為1.97%(n=6)。結(jié)論 本方法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為香連素片的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。
【關(guān)鍵詞】 香連素片;木香;薄層色譜法;鹽酸小檗堿;高效液相色譜法
Abstract:Objective To establish a method for quality control of Xiangliansu tablets. Methods Radix Auckiandiae in the tablets was identified by TLC. The content of berberine hydrochloride in the tablets was determined by HPLC. Results Radix Auckiandiae could be identified by TLC. Berberine hydrochloride showed a good linear correlation over the range of 0.0378-0.378 μg (r=0.999 7). The average recovery of berberine hydrochloride was 101.49% with RSD 1.97% (n=6). Conclutions The method is specific, accurate and reproducible for the equality control of Xiangliansu tablets.
Key words:Xiangliansu tablets;berberine hydrochloride;HPLC;Radix auckiandiae;TLC
香連素片是廣東萬(wàn)年青制藥有限公司的產(chǎn)品，具有清熱燥濕、行氣止痛的功效，臨床用于濕熱型痢疾、里急后重、腹痛泄瀉。其處方為木香500 g、鹽酸小檗堿75 g。原藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]鑒別木香用試管反應(yīng)，鹽酸小檗堿的含量用紫外分光光度法測(cè)定，方法專屬性較低且影響因素多。本文采用薄層色譜法鑒別木香、高效液相色譜法測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果表明操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為該品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步修訂提供了依據(jù)。
1 儀器與試藥
1.1 試藥
香連素片(批號(hào)：030801、030802、030803、040701、041002、050601、050802、060601、060602、060603)均為廣東萬(wàn)年青制藥有限公司產(chǎn)品;木香對(duì)照藥材(批號(hào)：921-9201)及鹽酸小檗堿對(duì)照品(批號(hào)：110713-200609)均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所;硅膠G預(yù)制板及硅膠G均由青島海洋化工廠生產(chǎn);乙腈為色譜純;其他試劑與試藥均為分析純。
1.2 儀器
LC?2010A高效液相色譜儀(日本島津), UV?2501PC紫外分光光度儀(日本島津), CQ?15A超聲波清洗器(上海躍進(jìn)醫(yī)用光學(xué)器材廠)。
2 薄層鑒別[2]
取本品2片，研成細(xì)粉，加三氯甲烷10 mL，超聲(功率120 W，頻率50 Hz)處理30 min，濾過(guò)，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。另取木香對(duì)照藥材0.2 g、不含木香的陰性樣品，同法分別制成對(duì)照藥材溶液及陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各3 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷?環(huán)己烷(體積比5∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)清晰。置可見(jiàn)光下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。
3 含量測(cè)定
3.1 色譜條件
色譜柱：phenomenex C18(150 mm×4.6 mm，5 μm) 流動(dòng)相：以磷酸鹽緩沖溶液[0.05 mol/L磷酸二氫鉀和0.01 mol/L十二烷基磺酸鈉(體積比1∶1)，含0.2%三乙胺]?乙腈(體積比60∶40)，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0為流動(dòng)相;流速：1.2 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：266 nm，柱溫：室溫，進(jìn)樣量：10 μL，理論塔板數(shù)不低于1500。
3.2 溶液的制備
3.2.1 對(duì)照品溶液的制備
取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1 mL含120 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
3.2.2 供試品溶液的制備
取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于鹽酸小檗堿60 mg)，置索氏提取器中，加鹽酸?甲醇(體積比1∶100)適量，加熱回流提取至提取液無(wú)色，將提取液(必要時(shí)濃縮)移至50 mL量瓶中，用少量鹽酸?甲醇(1體積比∶100)的混合液洗滌容器，洗液并入提取液中，并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。
3.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備
按照本品的處方、制法制備缺少鹽酸小檗堿的模擬樣品，按“3.2.2”項(xiàng)方法制成陰性對(duì)照溶液。
3.3 專屬性試驗(yàn)
分別取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照溶液，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照對(duì)鹽酸小檗堿測(cè)定無(wú)干擾，說(shuō)明方法專屬性強(qiáng)。結(jié)果見(jiàn)圖2。
3.4 線性關(guān)系的考察
精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，用乙醇溶解制成質(zhì)量濃度為37.8 μg/mL的溶液，分別精密吸取1、2、4、6、8、10 μL注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定色譜峰面積，以進(jìn)樣量(m)為橫坐標(biāo)，色譜峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)線性回歸，得線性回歸方程為Y=2.88725×106m-5586.84，r=0.999 7，表明鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.0378～0.378 μg范圍內(nèi)與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系。
3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
精密吸取同一批供試品溶液各10 μL，按上述色譜條件，每隔1 h測(cè)1次峰面積，結(jié)果表明鹽酸小檗堿在24 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.66%。
3.6 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批樣品共6份，分別按“3.2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)行制備溶液，并按上述色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果RSD=0.90%,表明方法重現(xiàn)性良好。
3.7 回收率試驗(yàn)
精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)：030802)共6份，分別精密加入對(duì)照品適量，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備溶液并按上述色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，計(jì)算加入量的回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。表1 鹽酸小檗堿加樣回收率試驗(yàn)(略)
3.8 準(zhǔn)確度考察
以含量限度下限的50%為范圍低限、以含量限度上限的150%為范圍高限，考察測(cè)定范圍的準(zhǔn)確度。
精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)：030802)，按含量范圍高、低限折算取樣量，各6份，分別精密加入對(duì)照品適量，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備溶液并按上述色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，計(jì)算加入量的回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。表2 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果(略)
3.9 樣品的測(cè)定
取10批樣品，分別按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備溶液，分別精密量取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，并按上述色譜條件，測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，結(jié)果見(jiàn)表3 。表3 樣品中鹽酸小檗堿的含量(略)
4 討 論
4.1 采用薄層色譜法鑒別木香時(shí),分別采用自制板及預(yù)制板同時(shí)展開(kāi)、預(yù)平衡與未平衡的條件展開(kāi)，層析結(jié)果表明：自制板與預(yù)制板的層析結(jié)果無(wú)差別，兩種展開(kāi)條件均可檢出木香特征斑點(diǎn)，但以未平衡的條件展開(kāi)，結(jié)果容易產(chǎn)生邊緣效應(yīng)，故展開(kāi)時(shí)預(yù)平衡10 min較好。
4.2 薄層層析的環(huán)境影響
分別在冰箱、室溫、相對(duì)濕度45%和75%的環(huán)境條件下展開(kāi)，結(jié)果表明：在上述環(huán)境條件展開(kāi)，均可檢出木香特征斑點(diǎn)，差異不大，故選用以室溫、相對(duì)濕度45%～75%為展開(kāi)環(huán)境條件，操作簡(jiǎn)便。
4.3 提取方法的選擇
參照國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)[1]，供試品溶液的制備是經(jīng)索氏提取后上氧化鋁柱洗脫，操作較繁瑣。我們對(duì)提取方法進(jìn)行了優(yōu)化，只經(jīng)索氏提取后直接測(cè)定，并與原提取方法的HPLC測(cè)定結(jié)果作對(duì)比。結(jié)果表明：只經(jīng)索氏提取與原提取方法的測(cè)定結(jié)果一致，因此樣品的提取采用索氏提取法。
4.4 測(cè)定波長(zhǎng)的.選擇
取對(duì)照品溶液， 在200～500 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，在349、266、231 nm均有最大吸收，經(jīng)HPLC試驗(yàn)比較，鹽酸小檗堿在266 nm波長(zhǎng)的峰面積值最大，故選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為266 nm。
4.5 流動(dòng)相的選擇
參考文獻(xiàn)[3,4]，采用磷酸鹽緩沖溶液[0.05 mol/L磷酸二氫鉀和0.01 mol/L十二烷基磺酸鈉(1∶1)，含0.2%三乙胺]?乙腈(60∶40),分別用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0、3.2、3.5為流動(dòng)相，經(jīng)試驗(yàn)，當(dāng)流動(dòng)相的pH值為3.0時(shí)對(duì)照品及樣品的峰形對(duì)稱，重復(fù)性好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，故確定流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖溶液[0.05 mol/L磷酸二氫鉀和0.01 mol/L十二烷基磺酸鈉(1∶1)，含0.2%三乙胺]?乙腈(60∶40)，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0。
4.6 耐用性考察
4.6.1 柱溫的考察
柱溫分別為室溫、40 ℃時(shí)，色譜峰的分離度、峰形及峰面積基本一致，故以室溫作為柱溫，操作較簡(jiǎn)便。
4.6.2 流速的考察
分別設(shè)定流速為1.0、1.2及1.5 mL/min進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明：當(dāng)流速為1.0 mL/min時(shí)保留時(shí)間太長(zhǎng)，當(dāng)流速分別為1.2及1.5mL/min時(shí)色譜峰的峰形及峰面積無(wú)甚差別，且前者的保留時(shí)間短一些，故選擇流速為1.2 mL/min。
4.6.3 色譜柱的考察
選用3種不同廠牌的色譜柱：phenomenex C18 (150 mm×4.60 mm,5 μm)、DiamonsilTM C18 (250 mm×4.60 mm,5 μm)和 Spherisorb C18 (250 mm×4.60 mm,5 μm)，測(cè)定同一批樣品(批號(hào)：060602)的含量，結(jié)果3種色譜柱測(cè)得含量的RSD=0.61%(n=2)，表明換用不同廠牌的色譜柱，均可得到滿意的色譜圖，故本法的耐用性好。
【參考文獻(xiàn)】
[1]WS3—B—2572—97.國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn):衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)第十三冊(cè)[S].1997:140.
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[3]龐小雄，宋粉云，鐘兆健，等.HPLC法測(cè)定拈痛丸中鹽酸小檗堿的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2007,23(3):240-242.
[4]張宇烽，馬安霓，陳小玲，等.HPLC法測(cè)定芩連葛根片鹽酸小檗堿的含量[J].廣東藥學(xué)，2004，14(7)：83.
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