淺談膽固醇對(duì)磷酸川芎嗪微乳透皮性質(zhì)的影響論文

　　微乳（microemulsion，ME）作為經(jīng)皮釋藥載體優(yōu)于一般的乳劑。理論上認(rèn)為微乳的層狀結(jié)構(gòu)決定其主要釋放方式為藥物由內(nèi)相經(jīng)表面活性劑/助表面活性劑層進(jìn)入外相，再由外相釋放至角質(zhì)層。藥物在外相中濃度升高，利于藥物的釋放，而藥物脂溶性增加與角質(zhì)層分配系數(shù)增加有直接的關(guān)系。前期針對(duì)磷酸川芎嗪（ligustrazine phosphate，LP）水溶性強(qiáng)、半衰期短的性質(zhì)制備了W/O型經(jīng)皮給藥微乳，體外研究顯示皮膚透過(guò)性提高，同時(shí)單次給藥可實(shí)現(xiàn)持續(xù)釋放。作為親水性藥物，磷酸川芎嗪經(jīng)皮吸收的限速步驟為其穿透角質(zhì)層的過(guò)程。而角質(zhì)層水化程度的提高有利于親水藥物的透皮吸收。由于膽固醇作為經(jīng)皮給藥制劑的添加劑能夠增加角質(zhì)層的水化程度，因此本研究考察在磷酸川芎嗪微乳中加入膽固醇后對(duì)藥物透皮特性的影響。

　　1 材料與方法

　　1.1 一般材料

　　1.1.1 動(dòng)物：Wistar大鼠，雄性，體質(zhì)量（200±20）g，購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK-（軍）2008-005。

　　1.1.2 儀器與試劑：TK-6A型透皮擴(kuò)散儀（上海得莘實(shí)業(yè)有限公司）；XP205 型萬(wàn)分之一電子天平（METILERTOLEDO，瑞士）；島津20A 高效液相色譜儀（SHIMADZU，日本）；SYZ-550型石英亞沸高純水蒸餾品（江蘇金壇正基儀器有限公司）；磷酸二氫鉀，磷酸氫二鉀（天津化學(xué)試劑三廠，分析純））；甲醇（Merckcompany，色譜純）；磷酸川芎嗪原料藥（北京雙鶴制藥股份有限公司，20070325，＞99%）；磷酸川芎嗪標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，100845-200501）；雙蒸水（自制）；肉豆蔻酸異丙酯（天津康科德試劑公司，分析純）；Labrasol 和plurololeique（Gattefosse company，法國(guó)）；膽固醇（天津康科德化學(xué)試劑有限公司，分析純）。

　　1.2 方 法

　　1.2.1 色譜方法

　　1.2.1.1 色譜條件：色譜柱：ShimpackC18 柱（250mm×4.6 mm，5μm，Shimadzu）；流動(dòng)相：為甲醇：水（60:40），流速1 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)285 nm。

　　1.2.1.2 磷酸川芎嗪儲(chǔ)備液的配制：精密稱取磷酸川芎嗪標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，用蒸餾水定容至100 ml，搖勻，備用。

　　1.2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取儲(chǔ)備液，按不同比 例 稀 釋 ，得 到 濃 度 為 0.21，1.05，4.20，10.50，42.00μg/ml不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)樣20μl，測(cè)定峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，記錄色譜圖，峰面積。

　　1.2.2 含不同濃度膽固醇微乳的制備：以肉豆蔻酸異 丙 酯 為 油 相 ，Labrasol 為 表 面 活 性 劑 ，plurololeique為助表面活性劑，按照表1的處方量將油相、表面活性劑、助表面活性劑、膽固醇和磷酸川芎嗪混合，磁力攪拌至澄清即得含膽固醇載藥微乳。

　　2 結(jié) 果

　　2.1 HPLC方法

　　2.1.1 色譜圖：圖1為不同標(biāo)準(zhǔn)品、空白微乳接收液和載藥微乳接收液的HPLC色譜圖。由圖可知實(shí)驗(yàn)液相條件下，磷酸川芎嗪峰能夠完全與接收液中干擾物質(zhì)分離。

　　2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定項(xiàng)下測(cè)得峰面積A，以A對(duì)濃度c進(jìn)行直線回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：A = 23502C+223.5，r = 0.9999，線性相關(guān)性良好。

　　3 討 論

　　微乳中的含水量直接影響角質(zhì)層水化程度，而含水量變化對(duì)水溶性藥物在微乳中溶解度有顯著影響。當(dāng)水相含量升高時(shí)，水溶性藥物在微乳中溶解度增加，即意味著藥物的熱力學(xué)穩(wěn)定性增加，其從微乳向皮膚擴(kuò)散的趨勢(shì)減小，藥物從微乳中的釋放速度減小。

　　膽固醇為微乳處方中常用的甾體化合物，少量使用不會(huì)對(duì)水溶性藥物在微乳中溶解度有顯著影響。其在與角質(zhì)層脂質(zhì)作用時(shí)插入酰胺之間。由于其結(jié)構(gòu)為剛性多平面甾體結(jié)構(gòu)，具有較大的空間結(jié)構(gòu)，增加了水分與脂質(zhì)極性末端作用的機(jī)會(huì)，能夠提高角質(zhì)層的水化程度。因此微乳中加入膽固醇可調(diào)節(jié)角質(zhì)層水化程度同時(shí)，但是對(duì)藥物在微乳中熱力學(xué)活性影響不大。本研究顯示，膽固醇的加入減小了磷酸川芎嗪微乳透皮遲滯時(shí)間。遲滯時(shí)間為經(jīng)皮給藥過(guò)程中皮膚與給藥載體之間達(dá)到熱力學(xué)平衡以及藥物在角質(zhì)層中分配達(dá)到平衡的過(guò)程，膽固醇縮短這一過(guò)程的其原因可以解釋為：膽固醇雖然能夠增加角質(zhì)層的.水化程度，但是水分來(lái)自于微乳。在增加角質(zhì)層水化程度的同時(shí)，也加速了微乳與角質(zhì)層之間的水化平衡過(guò)程，因此藥物透皮吸收速度更加趨于勻速。

　　而研究還發(fā)現(xiàn)，隨著膽固醇濃度的升高，相同含水量的微乳對(duì)角質(zhì)層水化作用增強(qiáng)。但是角質(zhì)層水化程度過(guò)高反而會(huì)影響親水性藥物的透皮吸收。原因?yàn)榻琴|(zhì)層水化程度過(guò)高會(huì)造成親水性藥物在角質(zhì)層中的滯留，抑制其向真皮層的擴(kuò)散。因此 1.5%膽固醇微乳透皮速率較前兩者反而降低。綜上所述，在制備親水性藥物經(jīng)皮給藥微乳時(shí)，可以考慮添加膽固醇來(lái)增加水溶性藥物透皮速率及減少遲滯時(shí)間，但同時(shí)需要考察膽固醇在微乳中濃度對(duì)藥物透皮吸收的影響。