公衛(wèi)執(zhí)業(yè)醫(yī)師考試輔導(dǎo)之造血干細胞的特性
一、造血干細胞的起源
造血干細胞(hemopoietic stem cell,HSC)是存在于造血組織中的一群原始造血細胞,它不是組織固定細胞,可存在于造血組織及血液中。造血干細胞在人胚胎2周時可出現(xiàn)于卵黃囊,第4周開始轉(zhuǎn)移至胚肝,妊娠5個月后,骨髓開始造血,出生后骨髓成為干細胞的主要來源。在造血組織中,所占比例甚少,如在小鼠骨髓中105核細胞中的有10個,在脾中105有核細胞中只有0.2個。
二、造血干細胞的形態(tài)
干細胞是一種嗜堿性獨核細胞,其大小約為8μm,呈圓形,胞核為圓形或腎形,胞核較大,具有2個核仁,染色質(zhì)細質(zhì)而分散,胞漿呈淺藍色不帶顆粒,在形態(tài)上與小淋巴細胞極其相似,但淋巴細胞體積較小,染色質(zhì)濃染,核仁不明顯且有細胞器。因此很難用形態(tài)學(xué)識別干細胞,并與其它獨核細胞相區(qū)別。
造血干細胞可包括三級分化水平,即多能干細胞(pleuripotent stem cell),定向干細胞(Committed stem cell)及其成熟的子代細胞。
關(guān)于對造血干細胞的功能分析,長期以來僅限于對小鼠干細胞的研究,而對人干細胞的存在只是來自間接證據(jù),因為不能在人體內(nèi)進行如鼠體內(nèi)的功能分析法。70年代以來,由于建立了新的體外細胞培養(yǎng)技術(shù),大大促進了對人干細胞的直接研究。
三、造血干細胞的表面標志
由于造血組織中造血干細胞在形態(tài)學(xué)方面無法與其它單核細胞區(qū)別,而且數(shù)量極少,這為造血干細胞的.分離純化并對其功能分析和分化的研究造成極大困難。
近年來由于單克隆抗體技術(shù)的進步,流式細胞儀(FACS)的應(yīng)用,以及對小鼠和人造血干細胞表面標志的研究,取得了很大進展,為造血細胞的分離純化及鑒定創(chuàng)造了條件。
1.Thy-1與絲裂原(wheat germ agglutinin,WGA)Visseer等發(fā)現(xiàn)小鼠骨髓中造血干細胞對WGA有高親和性。利用這一特性,應(yīng)用FACS自骨髓中分離造血干細胞應(yīng)及核系Mac-1等譜系抗原與WGA反應(yīng)性相結(jié)合,即可自骨髓中Lin-/WGA+細胞群中分離造血干細胞,也獲得良好結(jié)果。
也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)正常小鼠骨髓細胞中,也能表達低密度Thy-1抗原(Thy-11。)。如與上述標志組合,即自骨髓Thy-11。Lin-,WGA+細胞群中,分離造血干細胞,可用于對造血細胞的功能分析。
2.干細胞抗原(stemcellantigen-1,Sca-1) 有學(xué)者制備一種抗原前T細胞雜交瘤的單克隆抗體,用這種單抗檢出的抗原分子稱為干細胞抗原-1(Sca-1)。其后有人自骨髓中Thy-1Io、Lin-、Sca-1+細胞群中,可分離純?nèi)嗽煅杉毎?/p>
3.原癌基因(c-kit) 最近證明造血干細胞與c-kit基因密切相關(guān)。C-kit可編碼一種穿膜酪氨酸激酶受體分子。應(yīng)用單克隆抗體證明此分子可存在于造血干細胞膜上,其后證明它的配體分子是造血干細胞因子(stem cell factor,SCF)。它是信號傳導(dǎo)分子,對造血干細胞的分化具有重要作用。目前,小鼠多能干細胞表面分子標志可視為Thy-1Io、WGA+、c-kit+、Lin-。
4.CD34 對人體造血干細胞表面標志的研究,是用單克隆抗體CD34證明的。CD34單克隆抗體檢測的抗原即為CD34分子。自人骨髓細胞中應(yīng)用FACS可分離純化CD34+細胞群,如與造血因子共同體外培養(yǎng)可獲得含有各種血細胞的混合集落,所以CD34+細胞為骨髓中造血干細胞,CD34抗原可視為骨髓造血細胞標志之一。
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