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2015年執(zhí)業(yè)藥師《中藥化學(xué)》考點復(fù)習(xí)
中藥有效成分的提取
(一)根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離
1.結(jié)晶及重結(jié)晶法
利用不同溫度可引起物質(zhì)溶解度改變的性質(zhì)來分離物質(zhì)。選擇結(jié)晶溶劑的原則是：對要結(jié)晶的成分熱時溶解度大，冷時溶解度小，對雜質(zhì)冷熱都不溶或冷熱都易溶。另外要求結(jié)晶溶劑不與待結(jié)晶物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng);沸點較低、易揮發(fā);無毒或毒性很小。
判斷結(jié)晶純度的方法。
(1)晶型均一，色澤均勻。
(2)有一定的熔點和較小的熔距，熔距應(yīng)在2度以內(nèi)。
(3)TLC或PC分別用三種以上溶劑系統(tǒng)檢識，同單一圓整斑點。
(4)HPLC或GC檢查呈現(xiàn)單峰。
2.沉淀法
(1)在溶液中回入另一種溶劑以改變混合的極性，使一部分物質(zhì)沉淀析出。如：水提醇沉法(除去多糖或蛋白質(zhì));醇提水沉法(除去樹脂或葉綠素);醇提乙醚沉淀或丙酮沉淀法(使皂苷沉淀析出)
(2)pH法：對酸性、堿性或兩性有機化合物來說，�？赏ㄟ^加入酸、堿以調(diào)節(jié)溶液的pH值，改變分子的存在狀態(tài)(游離型或解離型)，從而改變?nèi)芙舛榷鴮崿F(xiàn)分離。
酸提堿沉法(使生物堿類成分沉淀)。堿提酸沉法(使黃酮、蒽醌等沉淀);等電點法(使蛋白質(zhì)沉淀)
(3)鹽類沉淀法：通過加入某種沉淀試劑，使生成水不溶性的類沉淀。
(二)根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比不同進(jìn)行分離
1.分配系數(shù)K
K=Cu/CL
K：表示分配系數(shù);Cu：表示溶質(zhì)在上相溶劑中的濃度;CL：表示溶質(zhì)在下相溶劑中的濃度。K越大越容易分離。
2.分離因子β
分離因子β可定義為A、B兩種溶質(zhì)在同一溶劑系統(tǒng)中分配系數(shù)的比值。
β=KA/KB
β越大越容易分離。
β≧100，僅作一次簡單萃取就可實現(xiàn)基本分離;若100>β>10，則須萃取10～12次;β≧2時，要想實現(xiàn)分離，須做100次以上萃取才能完成;β≈1時，則KA≈KB，意味著兩者極其相近，即使作任意次分配也無法實現(xiàn)分離。
3.分配比與pH
對酸性、堿性及兩性有機化合物來說，都具有游離型和解離型，二者可互相轉(zhuǎn)化，故在兩相中的分配比不同。
一般而言，pH<3時，酸性物質(zhì)多呈非解離狀態(tài)(HA)、堿性物質(zhì)呈解離狀態(tài)(BH+)存在，PH>12時，則酸性物質(zhì)呈解離狀態(tài)(A-)、堿性物質(zhì)呈非解離狀態(tài)(B)存在。
4.紙色譜
紙色譜屬于分配色譜，原理與液-液萃取法基本相同。
5.分配柱色譜
分離水溶性或極性較大的成分時，固定相多采用強極性溶劑，如水、緩沖溶液等，流動相一般選擇極性相對較小的有機溶劑，稱為正相分配色譜;反相分配色譜。
(三)根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離
1.物理吸附基本規(guī)律 — 相似者易于及附
硅膠、氧化鋁是極性吸附劑，遵循“相似者易于吸附”的經(jīng)驗規(guī)律�；钚蕴繛槭欠菢O性吸附劑，與硅膠、氧化鋁相反。
為避免發(fā)生化學(xué)吸附，酸性物質(zhì)宜用硅膠，堿性物質(zhì)則宜用氧化鋁進(jìn)行分離。
2.極性及其強弱判斷
化合物的極性由分子中所官能團決定
3.吸附色譜法應(yīng)用
4.聚酰胺
聚酰胺吸附屬于氫鍵吸附，酰胺羰基與酚類、黃酮類化合物的酚羥基，或酰胺鍵上的游離氨基與醌類、脂肪羧酸上的羰基形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附。吸附強弱則取決于各種化合物與之形成氫鍵締合的能力。
聚酰胺特別適合分離酚類、醌類、黃酮類化合物。
(1)形成氫鍵的基團數(shù)目越多，吸附能力越強。
(2)成鍵位置對吸附力也有影響。易形成分于內(nèi)氫鍵者，其在聚酰胺上的吸附相對減弱。
(3)分子中芳香化程度高者，則吸附性增強;反之則減弱。
一般情況下，各種溶劑在聚酸胺術(shù)上的洗脫能力由弱至強，可大致排列成下列順序：
水→甲醇→氫氧化鈉水溶液→甲酰胺→二甲基甲酰胺→尿素水溶液
5.大孔吸附樹脂
(1)吸附原理
大孔吸附樹脂是吸附性和分子篩性原理相結(jié)合的分子材料。吸附性是由于范德華引力或產(chǎn)生氫鍵的結(jié)果，分子篩性是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定的。
(2)影響吸附的因素
大孔吸附樹脂本身的性質(zhì)、溶劑的性質(zhì)和化合物的性質(zhì)是影響吸附的3個重要因素。
(3)大孔吸附樹脂的應(yīng)用
(4)洗脫液的選擇
洗脫液可使用甲醇、乙醇、丙醇、乙酸乙酯等。
(四)根據(jù)物質(zhì)分子大小差別進(jìn)行分離
物質(zhì)分子大小不同的化合物可用透析法、凝膠過濾法、超濾法、超速離心法等分離。
1.凝膠過濾法
凝膠過濾法也叫凝膠滲透色譜、分子篩過濾、排阻色譜，系利用分子篩分離物質(zhì)的一種方法。
常用的有葡聚糖凝膠(Sepadex-G)以及羥丙基葡聚糖凝膠(Sephadex-LH-20)。Sephadex G只適于在水中應(yīng)用。Sephadex LH-20既可在水中應(yīng)用，又可在由極性與非極性溶劑組成的混合溶劑中應(yīng)用。
2.膜過濾法
膜過濾法主要包括滲透、反滲透、超濾、電滲析、透析、液膜技術(shù)等。透析法多用于水溶性的大分子和小分子物質(zhì)的分離，如蛋白質(zhì)、酶、多糖分離過程中的脫鹽。按照孔徑大小，可將透析膜分為：微濾膜、超濾膜、反滲透膜、納米膜。
�、侪h(huán)烯醚萜苷易被水解，顏色變深。地黃及玄參等中藥在炮制及放置過程中變成黑色的原因。
(環(huán)烯醚萜苷水解生成的苷元為半縮醛結(jié)構(gòu)，其化學(xué)性質(zhì)活潑，容易進(jìn)一步發(fā)生氧化聚合等反應(yīng)，難以得到結(jié)晶性苷元，同時使顏色變深。)
②苷元遇酸、堿、羰基化合物和氨基酸等都能變色。
氨基酸反應(yīng)：環(huán)烯醚萜和氨基酸加熱，產(chǎn)生藍(lán)色沉淀。
乙酸-銅離子反應(yīng)：環(huán)烯醚萜的冰醋酸溶液，遇Cu2+加熱，產(chǎn)生藍(lán)色。
(七)皂苷顯色反應(yīng)
1.Liebermann反應(yīng)：
樣品溶于乙酐中，加入一滴濃硫酸，呈黃→紅→藍(lán)→紫→綠等顏色變化，最后褪色。
2.醋酐-濃硫酸(Liebermann-Burchard)反應(yīng)：
將樣品溶于醋酐中，加入濃硫酸-醋酐(1:20)數(shù)滴，呈色同上。此反應(yīng)可以區(qū)分三萜皂苷呈紅或紫色，甾體皂苷最終呈藍(lán)綠色。
3.三氯乙酸(Rosen-Heimer)反應(yīng)：
將含皂苷樣品的三氯甲烷溶液滴在濾紙上，加三氯乙酸試液一滴，加熱生成紅色漸變?yōu)樽仙�。在同樣條件下，甾體皂苷加熱至60 ℃顯色，三萜皂苷必須加熱至100℃才能顯色，也生成紅色漸變?yōu)樽仙�，可用于紙層析�?/p>
4.三氯甲烷-濃硫酸反應(yīng)：
樣品溶于三氯甲烷后加入濃硫酸，在三氯甲烷層呈現(xiàn)紅色或藍(lán)色，硫酸層有綠色的熒光。
5.五氯化銻反應(yīng)：
將皂苷樣品溶于三氯甲烷或醇后，點于濾紙上，噴以20%五氯化銻的三氯甲烷溶液(不應(yīng)含乙醇和水)，干燥后60～70℃加熱，顯藍(lán)色、灰藍(lán)色或灰紫色斑點。
6.芳香醛-硫酸或高氯酸反應(yīng)：
在使用芳香醛為顯色劑的反應(yīng)中，以香草醛最為普遍，其顯色靈敏，常作為甾體皂苷的顯色劑。除香草醛外，尚可應(yīng)用的還有對-二甲氨基苯甲醛。
糖的鑒定
苷類水解所得到的各種單糖和低聚糖的結(jié)構(gòu)大多數(shù)是已知的，只要與各種已知糖的標(biāo)準(zhǔn)品對照就可加以鑒定。但由于糖的水溶性很大，不易獲得結(jié)晶，有些物理常數(shù)無法測定，給印證工作帶來困難。以前多用化學(xué)方法制成衍生物，再作分離鑒定，步驟多，工作量大。而現(xiàn)在各種色譜技術(shù)的應(yīng)用，給糖類的鑒定帶來了極大的方便。
(一)紙色譜
(二)薄層色譜
(三)氣相色譜
(四)離子交換色譜
(五)液相色譜
糖鏈的結(jié)構(gòu)測定
要測定糖鏈的結(jié)構(gòu)主要是解決三個問題：單糖的組成、糖與糖的連接位置和順序、苷鍵的構(gòu)型。
(一)分子量的測定
苷的分子量測定目前大多采用質(zhì)譜法。但由于其極性大導(dǎo)致熱揮發(fā)性差，電子轟擊法(EI)和化學(xué)電離(CI)常不能得到理想的結(jié)果，一般采用場解吸(FD)、快原子轟擊(FAB)、電噴霧(ESI)等方法獲得[M+H]+、[M+Na]+等準(zhǔn)分子離子峰。
(二)單糖的鑒定
首先要了解苷中糖鏈由哪些單糖所組成，各種單糖之間的比例如何。一般是將苷鍵全部酸水解，然后用紙色譜檢出單糖的種類。經(jīng)顯色后用薄層掃描儀求得各種糖的分子比。單糖的定性定量也可以通過苷全甲基化并水解后得到的甲基化單糖的氣相色譜測定，但需要各種各樣的甲基化單糖作標(biāo)準(zhǔn)品。
(三)單糖之問連接位置的確定
將苷全甲基化，然后水解苷鍵，鑒定所有獲得的甲基化單糖，其中游離的一OH的部位就是連接位置。水解要盡可能溫和，否則會發(fā)生去甲基化反應(yīng)和降解反應(yīng)。
(四)糖鏈連接順序的確定
(五)苷鍵構(gòu)型的決定
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