[合集]生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告15篇
在人們素養(yǎng)不斷提高的今天，越來越多人會(huì)去使用報(bào)告，不同的報(bào)告內(nèi)容同樣也是不同的。為了讓您不再為寫報(bào)告頭疼，下面是小編收集整理的生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告，供大家參考借鑒，希望可以幫助到有需要的朋友。
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生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告1
生物學(xué)是一門以實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)的自然科學(xué)，現(xiàn)代生物科學(xué)的發(fā)展尤其依賴科學(xué)實(shí)驗(yàn)。在生物中，實(shí)驗(yàn)、學(xué)習(xí)和觀察等實(shí)踐環(huán)節(jié)對(duì)我們掌握生物學(xué)知識(shí)、科學(xué)方法、培養(yǎng)我們的動(dòng)手能力和形成科學(xué)素質(zhì)都起到了至關(guān)重要的作用。正是因此，從我們開始接觸生物這門學(xué)科開始，就不斷有生物實(shí)驗(yàn)課程，鍛煉我們各式各樣的能力。
但是，也的確是上過各式各樣的生物實(shí)驗(yàn)課，我才更加深刻的感受到這次做的現(xiàn)代生物技術(shù)綜合實(shí)驗(yàn)對(duì)我的影響有多大。
老師在第一次課上，對(duì)我們?cè)敱M的講解了我們此學(xué)期需要完成的一系列實(shí)驗(yàn)。其中全是環(huán)環(huán)相扣，嵌合緊密，有點(diǎn)一招即失，滿盤皆輸?shù)膲毫�，不過我們更多的是懷著一種躍躍欲試的激動(dòng)，恨不得立馬動(dòng)手，靠著自己學(xué)來的知識(shí)，認(rèn)真的完成這套實(shí)驗(yàn)，并且還能看到最終那令人欣喜的結(jié)果。就這么妄想著妄想著，我們從第二周開始的現(xiàn)代生物技術(shù)綜合實(shí)驗(yàn)的漫長(zhǎng)旅程。
由于，老師沒有硬性的要求實(shí)驗(yàn)時(shí)間，我們便是一有空閑就往實(shí)驗(yàn)室里鉆，也就少了以前實(shí)驗(yàn)課上出現(xiàn)的，因?yàn)椴糠謱?shí)驗(yàn)儀器的數(shù)量缺少，同學(xué)們每次做實(shí)驗(yàn)都是你推我嚷的，造成了實(shí)驗(yàn)興趣的流失。以至于做實(shí)驗(yàn)的態(tài)度越來越渙散，甚至只是簡(jiǎn)單的走下過場(chǎng)而已，幾次實(shí)驗(yàn)課下來，熱情全無。但按照金老師的提議來，大家來實(shí)驗(yàn)的時(shí)間不同，使得對(duì)儀器使用的時(shí)間錯(cuò)開，減少了為爭(zhēng)搶儀器或是藥品而嘈雜不堪的場(chǎng)面，實(shí)驗(yàn)也變得順利了許多。
金老師會(huì)很體諒一些先開始忙活的同學(xué)，在黑板上寫清他們實(shí)驗(yàn)大概會(huì)做到的步驟和注意事項(xiàng)，后面實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備物品和要求，然后開始在忙于實(shí)驗(yàn)而奔走中的同學(xué)之間晃悠。觀察我們的實(shí)驗(yàn)操作，或是時(shí)不時(shí)提點(diǎn)解釋一下我們實(shí)驗(yàn)步驟的緣由；實(shí)驗(yàn)藥品的作用；如何做會(huì)得到更好的結(jié)果；實(shí)驗(yàn)沒有得到好的結(jié)果或是做的失敗了的原因�？墒�，隨著實(shí)驗(yàn)的發(fā)展，后來更多的時(shí)候，是我們?cè)诳催^書本上要求的實(shí)驗(yàn)步驟后，去纏著金老師，圍在他周圍，問他關(guān)于實(shí)驗(yàn)的各種問題，就算同樣的問題被問過許多次，金老師依然是和藹的笑著一一解答我們的疑問，他的平易近人，他的悉心教導(dǎo)，他的不驕不躁，他的耐性與笑容都深深的打動(dòng)了實(shí)驗(yàn)中的每位同學(xué)。
其實(shí)，他的這種教學(xué)方式，亮點(diǎn)就在于此，自主實(shí)驗(yàn)迫使我們會(huì)仔細(xì)品味步驟中的點(diǎn)滴；實(shí)驗(yàn)過程中的出現(xiàn)的各種問題，就要求我們會(huì)去思考如何排除，繼續(xù)實(shí)驗(yàn)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不理想，更是強(qiáng)迫我們能認(rèn)真回顧實(shí)驗(yàn)中的任何細(xì)節(jié)，找出問題所在，也會(huì)需要我們?nèi)ド钊肓私膺@步實(shí)驗(yàn)的機(jī)理，用藥品的理由，實(shí)驗(yàn)操作要求等。這些自己通過自己動(dòng)手動(dòng)腦而逐步累積起來的經(jīng)驗(yàn)，是在以往任何時(shí)候都沒有獲得過的，那時(shí)，只知道按照老師和書本上寫的步驟來，根本不在意為什么要這么做，于是少了對(duì)實(shí)驗(yàn)的探究，能學(xué)到的東西自然也減少。
說完對(duì)金老師和老師方式的看法，其次我想談?wù)�，我在這樣的教學(xué)指導(dǎo)下獲得的收獲。
我是一個(gè)很懶散的人，以前做實(shí)驗(yàn)，大部分都是照本宣科，很少動(dòng)腦筋去思考實(shí)驗(yàn)的前因后果，對(duì)臺(tái)上老師的講解也都是一知半解的混著。但是，這次實(shí)驗(yàn)著實(shí)讓我很費(fèi)了一番腦子，有深入的去了解個(gè)中原理，實(shí)驗(yàn)操作的機(jī)理，儀器的.使用方法，幫助我糾正和熟練許多操作，同時(shí)讓我認(rèn)識(shí)到自己以前的迷糊與不負(fù)責(zé)任，也讓我體會(huì)到全身心的投入到一件事中，是如此快樂和滿足，還得到了好多在課堂上永遠(yuǎn)無法獲得的知識(shí)。下面，具體說說看我的幾件不小的收獲。
第一件，混實(shí)驗(yàn)室久了，我有了可以“變出”任何大家想要的器皿的“功能”，只要是實(shí)驗(yàn)室里有的且我們熟知的物品（老師打包裝起來的不算），無論是藥品試劑，還是不同規(guī)格的量筒試管，我都可以摸出來，省去了四處找老師尋求幫助的時(shí)間和氣力。
第二件，學(xué)會(huì)了配置許多的試劑，于是知道了不同的試劑配置需要注意的問題，鞏固了某些藥品相關(guān)的知識(shí)，并且在多次配置時(shí)，得出了一個(gè)結(jié)論：如果不是很熟悉的試劑配方，最好是拿一個(gè)專門的本子記錄下來，以備不時(shí)之需，這樣一來，以后實(shí)驗(yàn)也不會(huì)因?yàn)樵噭┑膯栴}而手忙腳亂。
第三件，實(shí)驗(yàn)步驟需要仔細(xì)的斟酌其中的奧秘，每一步如此走，自然有前人的用意，畢竟這些實(shí)驗(yàn)都是過去的科學(xué)家研究出來的精華繼承，理解了他們的意圖和原由，做起實(shí)驗(yàn)來會(huì)更加的得心應(yīng)手也不易遺忘或出錯(cuò)。
第四件，這件是我最大的心得，也不全是從此次實(shí)驗(yàn)中得來，且也不是只能運(yùn)用于做實(shí)驗(yàn)中，這份心得是：在決定要做的事情后，最好考慮清楚行動(dòng)時(shí)會(huì)需要用些什么，做些什么，將準(zhǔn)備工作做好，為后續(xù)行動(dòng)鋪墊，按其規(guī)律列好清單，會(huì)使得實(shí)驗(yàn)或者任何別的事情做得更加順利，有條理，排除做過多無用功的可能性，提高了效率的同時(shí)還降低錯(cuò)誤失誤的出現(xiàn)概率，成功率也會(huì)增高。
以上是我這個(gè)學(xué)期里，從現(xiàn)代生物技術(shù)綜合實(shí)驗(yàn)里得到的一些心得。我希望在下個(gè)學(xué)期里，我能將自己從這里得到的心得，學(xué)習(xí)應(yīng)用到其他的實(shí)驗(yàn)甚至是學(xué)習(xí)生活中去，擴(kuò)充自己的知識(shí)，拓寬自己的視野，增厚自己的底蘊(yùn)，加強(qiáng)自己的能力，不敢放言稱自己要成為未來生物界中的一流人才，只能勉勵(lì)自己成為一個(gè)不負(fù)眾望的有用的人。
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告2
實(shí)驗(yàn)一觀察DNA和RNA在細(xì)胞中的分布
實(shí)驗(yàn)原理：DNA綠色，RNA紅色
分布：真核生物DNA主要分布在細(xì)胞核中，線粒體和葉綠體內(nèi)也含有少量的DNA;RNA主要分布在細(xì)胞質(zhì)中。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：細(xì)胞核呈綠色，細(xì)胞質(zhì)呈紅色。
實(shí)驗(yàn)二物質(zhì)鑒定
還原糖+斐林試劑磚紅色沉淀
脂肪+蘇丹III橘黃色
脂肪+蘇丹IV紅色
蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑紫色反應(yīng)
1、還原糖的檢測(cè)
(1)材料的選�。哼�原糖含量高，白色或近于白色，如蘋果，梨，白蘿卜。
(2)試劑：斐林試劑(甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液)，現(xiàn)配現(xiàn)用。
(3)步驟：取樣液2mL于試管中→加入剛配的斐林試劑1mL(斐林試劑甲液和乙液等量混合均勻后再加入)→水浴加熱2min左右→觀察顏色變化(白色→淺藍(lán)色→磚紅色)
★模擬尿糖的檢測(cè)
1、取樣：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液
2、檢測(cè)方法：斐林試劑(水浴加熱)或班氏試劑或尿糖試紙
3、結(jié)果：(用斐林試劑檢測(cè))試管內(nèi)發(fā)生出現(xiàn)磚紅色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出現(xiàn)磚紅色沉淀的是正常人的尿液。
4、分析：因?yàn)樘悄虿』颊叩哪蛞褐泻羞�原糖，與斐林試劑發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生磚紅色沉淀，而正常人尿液中無還原糖，所以沒有發(fā)生反應(yīng)。
2、脂肪的檢測(cè)
(1)材料的選�。汉玖吭礁叩慕M織越好，如花生的子葉。
(2)步驟：制作切片(切片越薄越好)將最薄的花生切片放在載玻片中央
染色(滴蘇丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴體積分?jǐn)?shù)50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精)
制作裝片(滴1～2滴清水于材料切片上→蓋上蓋玻片)
鏡檢鑒定(顯微鏡對(duì)光→低倍鏡觀察→高倍鏡觀察染成橘黃色的脂肪顆粒)
3、蛋白質(zhì)的檢測(cè)
(1)試劑：雙縮脲試劑(A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液)
(2)步驟：試管中加樣液2mL→加雙縮脲試劑A液1mL，搖勻→加雙縮尿試劑B液4滴，搖勻→觀察顏色變化(紫色)
考點(diǎn)提示：
(1)常見還原性糖與非還原性糖有哪些?
葡萄糖、果糖、麥芽糖都是還原性糖;淀粉、蔗糖、纖維素都是非還原性糖。
(2)還原性糖植物組織取材條件?
含糖量較高、顏色為白色或近于白色，如：蘋果、梨、白色甘藍(lán)葉、白蘿卜等。
(3)研磨中為何要加石英砂?不加石英砂對(duì)實(shí)驗(yàn)有何影響?
加石英砂是為了使研磨更充分。不加石英砂會(huì)使組織樣液中還原性糖減少，使鑒定時(shí)溶液顏色變化不明顯。
(4)斐林試劑甲、乙兩液的使用方法?混合的目的?為何要現(xiàn)混現(xiàn)用?
混合后使用;產(chǎn)生氫氧化銅;氫氧化銅不穩(wěn)定。
(5)還原性糖中加入斐林試劑后，溶液顏色變化的順序?yàn)椋簻\藍(lán)色棕色磚紅色
(6)花生種子切片為何要薄?只有很薄的切片，才能透光，而用于顯微鏡的觀察。
(7)轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋時(shí)，若花生切片的細(xì)胞總有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么?切片的厚薄不均勻。
(8)脂肪鑒定中乙醇作用?洗去浮色。
(9)雙縮脲試劑A、B兩液是否混合后用?先加A液的目的。怎樣通過對(duì)比看顏色變化?
不能混合;先加A液的目的是使溶液呈堿性;先留出一些大豆組織樣液做對(duì)比。
實(shí)驗(yàn)三觀察葉綠體和細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)
1、材料：新鮮蘚類葉、黑藻葉或菠菜葉，口腔上皮細(xì)胞臨時(shí)裝片
2、原理：葉綠體在顯微鏡下觀察，綠色，球形或橢球形。
用健那綠染液染色后的口腔上皮細(xì)胞中線粒體成藍(lán)綠色，細(xì)胞質(zhì)接近無色。
知識(shí)概要：
取材制片低倍觀察高倍觀察
考點(diǎn)提示：
(1)為什么可直接取用蘚類的小葉，而不能直接取用菠菜葉?
因?yàn)樘\類的小葉很薄，只有一層細(xì)胞組成，而菠菜葉由很多層細(xì)胞構(gòu)成。
(2)取用菠菜葉的下表皮時(shí)，為何要稍帶些葉肉?
表皮細(xì)胞除保衛(wèi)細(xì)胞外，一般不含葉綠體，而葉肉細(xì)胞含較多的葉綠體。
(3)怎樣加快黑藻細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)速度?最適溫度是多少?進(jìn)行光照、提高水溫、切傷部分葉片;25℃左右。
(4)對(duì)黑藻什么部位的細(xì)胞觀察，所觀察到的細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)的現(xiàn)象最明顯?葉脈附近的細(xì)胞。
(5)若視野中某細(xì)胞中細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)方向?yàn)轫槙r(shí)針，則在裝片中該細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)的實(shí)際流動(dòng)方向是怎樣的?仍為順時(shí)針。
(6)是否一般細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)不流動(dòng)，只有黑藻等少數(shù)植物的細(xì)胞質(zhì)才流動(dòng)?
否，活細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)都是流動(dòng)的。
(7)若觀察植物根毛細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)，則對(duì)顯微鏡的視野亮度應(yīng)如何調(diào)節(jié)?
視野應(yīng)適當(dāng)調(diào)暗一些，可用反光鏡的平面鏡來采光或縮小光圈。
(8)在強(qiáng)光照射下，葉綠體的向光面有何變化?葉綠體的受光面積較小有一面面向光源實(shí)驗(yàn)四觀察有絲分裂。
1、材料：洋蔥根尖(蔥，蒜)
2、步驟：
(一)洋蔥根尖的培養(yǎng)
(二)裝片的制作
制作流程：解離→漂洗→染色→制片
1.解離：藥液：質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的.鹽酸，體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精(1：1混合液)。時(shí)間：3~5min.目的：使組織中的細(xì)胞相互分離開來。
2.漂洗：用清水漂洗約10min.目的：洗去藥液，防止解離過度，并有利于染色。
3.染色：用質(zhì)量濃度為0.01g/mL或0.02g/mL的龍膽紫溶液(或醋酸洋紅液)染色3~5min。目的：使染色體著色，利于觀察。
4.制片：將根尖放在載玻片上，加一滴清水，并用鑷子把根尖弄碎，蓋上蓋玻片，在蓋玻片上再加一片載玻片。然后用拇指輕輕地按壓載玻片。目的：使細(xì)胞分散開來，有利于觀察。
(三)觀察
1、先在低倍鏡下找到根尖分生區(qū)細(xì)胞：細(xì)胞呈正方形，排列緊密，有的細(xì)胞正在分裂。
2、換高倍鏡下觀察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂間期。(注意各時(shí)期細(xì)胞內(nèi)染色體形態(tài)和分布的特點(diǎn))。其中，處于分裂間期的細(xì)胞數(shù)目最多。
考點(diǎn)提示：
(1)培養(yǎng)根尖時(shí)，為何要經(jīng)常換水?增加水中的氧氣，防止根進(jìn)行無氧呼吸造成根的腐爛。
(2)培養(yǎng)根尖時(shí)，應(yīng)選用老洋蔥還是新洋蔥?為什么?應(yīng)選用舊洋蔥，因?yàn)樾卵笫[尚在休眠，不易生根。
(3)為何每條根只能用根尖?取根尖的時(shí)間是何時(shí)?為何?
因?yàn)楦夥稚鷧^(qū)的細(xì)胞能進(jìn)行有絲分裂;上午10時(shí)到下午2時(shí);因?yàn)榇藭r(shí)細(xì)胞分裂活躍。
(4)解離和壓片的目的分別是什么?壓片時(shí)為何要再加一塊載玻片?解離是為了使細(xì)胞相互分離開來，壓片是為了使細(xì)胞相互分散開來;再加一塊載玻片是為了受力均勻，防止蓋玻片被壓破。
(5)若所觀察的組織細(xì)胞大多是破碎而不完整的，其原因是什么?壓片時(shí)用力過大。
(6)解離過程中鹽酸的作用是什么?丙酮可代替嗎?分解和溶解細(xì)胞間質(zhì);不能，而硝酸可代替。
(7)為何要漂洗?洗去鹽酸便于染色。
(8)細(xì)胞中染色最深的結(jié)構(gòu)是什么?染色最深的結(jié)構(gòu)是染色質(zhì)或染色體。
(9)若所觀察的細(xì)胞各部分全是紫色，其原因是什么?
染液濃度過大或染色時(shí)間過長(zhǎng)。
(10)為何要找分生區(qū)?分生區(qū)的特點(diǎn)是什么?能用高倍物鏡找分生區(qū)嗎?為什么?
因?yàn)樵诟庵挥蟹稚鷧^(qū)的細(xì)胞能夠進(jìn)行細(xì)胞分裂;分生區(qū)的特點(diǎn)是：細(xì)胞呈正方形，排列緊密，有的細(xì)胞處于分裂狀態(tài);不能用高倍鏡找分生區(qū)，因?yàn)楦弑剁R所觀察的實(shí)際范圍很小，難以發(fā)現(xiàn)分生區(qū)。
(11)分生區(qū)細(xì)胞中，什么時(shí)期的細(xì)胞最多?為什么?間期;因?yàn)樵诩?xì)胞周期中，間期時(shí)間最長(zhǎng)。
(12)所觀察的細(xì)胞能從中期變化到后期嗎?為什么?
不能，因?yàn)樗^察的細(xì)胞都是停留在某一時(shí)期的死細(xì)胞。
(13)觀察洋蔥表皮細(xì)胞能否看到染色體?為什么?不能，因?yàn)檠笫[表皮細(xì)胞一般不分裂。
(14)若觀察時(shí)不能看到染色體，其原因是什么?
沒有找到分生區(qū)細(xì)胞;沒有找到處于分裂期的細(xì)胞;染液過稀;染色時(shí)間過短。
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告3
實(shí)驗(yàn)日期： 年月 日
組長(zhǎng)： 組員：
一、實(shí)驗(yàn)要求
1、練習(xí)使用顯微鏡，學(xué)習(xí)規(guī)范的操作方法。
2、能夠獨(dú)立操作顯微鏡。
3、能夠?qū)⒉Ｆ瑯?biāo)本移動(dòng)到視野中央，并看到清晰的圖像。
二、實(shí)驗(yàn)原理
三、材料用具
顯微鏡，寫有“上”字的玻片，動(dòng)物、植物玻片標(biāo)本，擦鏡紙，紗布。
四、方法與步驟
�。ㄒ唬┤＄R和安放
1、右手握住鏡臂，左手托住鏡座
2、把顯微鏡放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，略偏左。安裝好目鏡和物鏡。
（二）對(duì)光
3、轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔（物鏡的'前端與載物臺(tái)要保持2厘米的距離）。
4、把一個(gè)較大的光圈對(duì)準(zhǔn)通光孔。左眼注視目鏡內(nèi)（右眼睜開，便于以后同時(shí)畫圖）。轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內(nèi)。通過目鏡，以看到白亮的視野。
�。ㄈ┯^察
5、把所要觀察的玻片標(biāo)本（也可以用印有“e”字的薄紙片制成）放在載物臺(tái)上，用壓片夾壓住，標(biāo)本要正對(duì)通光孔的中心。
6、轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標(biāo)本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標(biāo)本）。
7、左眼向目鏡內(nèi)看，同時(shí)反方向轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。再略微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使看到的物像更加清晰。
注意事項(xiàng)：
1、實(shí)驗(yàn)完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，把兩個(gè)物鏡偏到峽谷旁。最后把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里，
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告4
質(zhì)粒DNA的提取、純化及檢測(cè)
姓名：XXX學(xué)號(hào)：2011001400XX年級(jí)：20xx級(jí)生物基地班 實(shí)驗(yàn)日期：20xx年9月16日—30日組別：6組 同組者：XX
一、【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/strong>
1、掌握堿變性提取法提取大腸桿菌中質(zhì)粒DNA的原理和方法。
2、學(xué)習(xí)并掌握凝膠電泳進(jìn)行DNA的分離純化的實(shí)驗(yàn)原理。
3、學(xué)習(xí)并掌握凝膠的制備及電泳方法。
4、學(xué)習(xí)并掌握凝膠中DNA的分離純化方法。
二、【實(shí)驗(yàn)原理】
1、質(zhì)粒DNA的制備方法
質(zhì)粒（Plasmid）是獨(dú)立存在于染色體外、能自主復(fù)制并能穩(wěn)定遺傳的一種環(huán)狀雙鏈DNA分子，分布于細(xì)菌、放線菌、真菌以及一些動(dòng)植物細(xì)胞中，但在細(xì)菌細(xì)胞中含量最多。細(xì)菌質(zhì)粒大小介于1～200Kb之間，是應(yīng)用最多的質(zhì)粒類群，在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)它們利用宿主細(xì)胞的復(fù)制機(jī)構(gòu)合成質(zhì)粒自身的DNA。
質(zhì)粒DNA的制備包括3個(gè)步驟：①培養(yǎng)細(xì)菌，使質(zhì)粒DNA大量擴(kuò)增；②收集和裂解細(xì)菌；③分離和純化質(zhì)粒DNA。主要方法包括：堿裂解法：0。2molNaOH+1%SDS；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；SDS裂解法：10%SDS，一般用于質(zhì)粒大量提取。在實(shí)際操作中可以根據(jù)宿主菌株類型、質(zhì)粒分子大小、堿基組成和結(jié)構(gòu)等特點(diǎn)以及質(zhì)粒DNA的用途進(jìn)行選擇。本實(shí)驗(yàn)選擇堿裂解法提取質(zhì)粒DNA。
2、質(zhì)粒DNA的提取——堿變性提取法
在細(xì)菌細(xì)胞中，染色體DNA和質(zhì)粒DNA均被釋放出來，但是兩者變性與復(fù)性所依賴的溶pH值不同。在pH值高達(dá)12。0的堿性溶液中，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性；共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵斷裂，但兩條互補(bǔ)鏈不完全分離。因?yàn)樗鼈冊(cè)谕負(fù)鋵W(xué)上是相互纏繞的。當(dāng)用pH值4。6的KAc（NaAc）高鹽溶液調(diào)節(jié)堿性溶液至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA可恢復(fù)原來的共價(jià)閉合環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)而溶解于溶液中；但染色體DNA不能復(fù)性，而是與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物等一起形成纏連的、可見的白色絮狀沉淀。這種沉淀通過離心，與復(fù)性的溶于溶液的質(zhì)粒DNA分離。溶于上清液的質(zhì)粒DNA，可用無水乙醇和鹽溶液，使之凝聚而形成沉淀。由于DNA和RNA性質(zhì)類似，乙醇沉淀
DNA的同時(shí)，也伴隨著RNA沉淀，可利用RNaseA將RNA降解。質(zhì)粒DNA溶液中的RNaseA以及一些可溶性蛋白，可通過酚/氯仿抽提除去，最后獲得純度較高的質(zhì)粒DNA。
3、凝膠電泳進(jìn)行DNA分離純化
電泳（electrophoresis）是帶電物質(zhì)在電場(chǎng)中向著與其電荷相反的電極方向移動(dòng)的現(xiàn)象。各種生物大分子在一定pH條件下，可以解離成帶電荷的離子，在電場(chǎng)中會(huì)向相反的電極移動(dòng)。凝膠是支持電泳介質(zhì)，它具有分子篩效應(yīng)。含有電解液的凝膠在電場(chǎng)中，其中的電離子會(huì)發(fā)生移動(dòng)，移動(dòng)的速度可因電離子的大小形態(tài)及電荷量的不同而有差異。利用移動(dòng)速度差異，就可以區(qū)別各種大小不同的分子。因而，凝膠電泳可用于分離、鑒定和純化DNA的片段，是分子生物學(xué)的核心技術(shù)之一。
凝膠電泳技術(shù)操作簡(jiǎn)單而迅速，分辨率高，分辨范圍廣。此外，凝膠中DNA的位置可以用低濃度熒光插入染料如溴化乙錠（ethidium bromide，EB）或SYBR Gold染色直接觀察到，甚至含量少至20pg的雙鏈DNA在紫外激發(fā)下也能直接檢測(cè)到。需要的話，這些分離的DNA條帶可以從凝膠中回收，用于各種各樣目的的實(shí)驗(yàn)。
分子生物學(xué)中，常用的兩種凝膠為瓊脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝膠。這兩種凝膠能灌制成各種形狀、大小和孔徑，也能以許多不同的構(gòu)型和方位進(jìn)行電泳。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高，使用于較小分子核酸（5—500bp）的分離和蛋白質(zhì)電泳。它的分辨率非常高，長(zhǎng)度上相差1bp或質(zhì)量上相差0。1%的DNA都可以彼此分離，這也是采用聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行DNA序列分析的分子基礎(chǔ)。雖然它能很快地進(jìn)行電泳，并能容納較大的DNA上樣量，但是與瓊脂糖凝膠相比，在制備和操作上繁瑣。瓊脂糖是從海藻中提取的長(zhǎng)鏈狀多聚物，由β—D—吡喃半乳糖與3，6—脫水—L—吡喃半乳糖組成，相對(duì)分子質(zhì)量為104—105。瓊脂糖加熱至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液體，澆在模版上冷卻后形成凝膠，其凝固點(diǎn)為40—45℃。瓊脂糖凝膠相對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠分辨率低，但它的分離范圍更大（50至百萬bp），小片段DNA（50—20000bp）最適合在恒定輕度和方向的電場(chǎng)中水平方向的瓊脂糖凝膠內(nèi)電泳分離。瓊脂糖凝膠電泳易于操作，適用于核酸電泳，測(cè)定DNA的相對(duì)分子質(zhì)量，分離經(jīng)限制酶水解的DNA的片段，進(jìn)一步純化DNA等。
瓊脂糖凝膠電泳是一種常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而帶有負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。DNA在瓊脂糖凝膠中的電泳遷移率主要取決于6個(gè)因素：樣品DNA分子的`大小、DNA分子的構(gòu)象、瓊脂糖濃度、電泳所用電場(chǎng)、緩沖液和溫度。
三、【實(shí)驗(yàn)材料】
1、實(shí)驗(yàn)儀器
培養(yǎng)皿、接種環(huán)、三角瓶、酒精燈、恒溫振蕩培養(yǎng)箱、50ml離心管、1。5ml塑料離心管（Eppendorf管）、高速離心機(jī)、漩渦振蕩器、微量移液器、不同型號(hào)槍頭、天平、制膠槽、梳子、電泳儀、吸管、量筒、微波爐、滅菌鍋、恒溫水浴鍋、試劑瓶、衛(wèi)生紙和記號(hào)筆、手套等。
2、實(shí)驗(yàn)試劑
LB培養(yǎng)基，抗生素Ap（氨芐青霉素），溶液Ⅰ，溶液Ⅱ，溶液Ⅲ，RNaseA母液，TE緩沖液，飽和酚，氯仿/異戊醇混合液，酚/氯仿/異戊醇（PCI）混合液，預(yù)冷無水乙醇，TAE電泳緩沖液（10×），上樣緩沖液（6×），瓊脂糖，溴化乙錠（EB），DNA相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物DNA Marker λ/Hind Ⅲ，5mol/L pH 5。2的醋酸鈉。
四、【實(shí)驗(yàn)步驟】
1、準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)
配制LB液體培養(yǎng)基，分裝到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配LB固體培養(yǎng)基；準(zhǔn)備1000ul、200ul、10ul移液槍尖各一盒，1。5ml離心管若干于500ml三角瓶中，50ml離心管2個(gè) ，將上述物品包好連同配好的培養(yǎng)基一同滅菌。
2、菌體培養(yǎng)
在含有Ap的LB平板上挑取一環(huán)攜帶有質(zhì)粒pUC19的E。coli DH5單菌落，接種于20mlLB液體培養(yǎng)基中進(jìn)行37℃振蕩過夜培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加Ap100ul
（100ug/ml），質(zhì)粒pUC19具有Ap抗性基因，使得帶有pUC19的質(zhì)粒得以生長(zhǎng)。 過夜培養(yǎng)后菌體量大，雜質(zhì)較多，然后用移液槍吸取過夜培養(yǎng)物2ml轉(zhuǎn)接于50mlLB液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中加入Ap250ul，37℃振蕩培養(yǎng)4—6h至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后期，生長(zhǎng)速率快，代謝旺盛，酶系活躍，雜質(zhì)少，適合提取質(zhì)粒。
3、質(zhì)粒提取
�。�1）稱量空的50ml離心管的重量為14。331g，然后將三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒?jié)M，液面距管口約1cm，7000rpm離心5分鐘后棄去上清液，收集菌體細(xì)胞。
�。�2）向離心管中懸滴加入5ml冰預(yù)冷的溶液Ⅰ打散菌體洗滌，用漩渦振蕩器使之充分懸浮后用槍尖吹吸混勻，同步驟（1）離心，棄去上清，將離心管倒置于吸水紙上，使上清液全部流盡干燥，然后稱重得14。437g，則菌體質(zhì)量為106mg。
�。�3）洗滌后每100mg菌體應(yīng)加入冰預(yù)冷的溶液Ⅰ1ml，106mg菌體按100mg菌體處理，加入溶液Ⅰ1ml，打散菌泥、吹吸混勻，冰浴5min。溶液Ⅰ中的葡萄糖使
溶液密度增加，懸浮后的大腸桿菌不會(huì)快速沉積到管子的底部；維持滲透壓，防止細(xì)胞提前破裂，防止DNA受機(jī)械剪切力作用而降解。EDTA是Ca2+和Mg2+等二價(jià)金屬離子的螯合劑，可抑制DNase的活性，抑制微生物的生長(zhǎng)。Tris—Cl溶液提供適當(dāng)?shù)膒H。
（4） 按比例加入新配制的溶液Ⅱ2ml（與溶液Ⅰ對(duì)應(yīng)），輕加輕搖，冰浴5min。溶液變清亮透明粘稠如蛋清狀。溶液Ⅱ中的NaOH使細(xì)胞膜發(fā)生了從bilayer（雙層膜）結(jié)構(gòu)向micelle（微囊）結(jié)構(gòu)的相變化導(dǎo)致細(xì)胞溶解。同時(shí)，強(qiáng)堿性使染色體DNA、質(zhì)粒DNA和蛋白質(zhì)變性；SDS為下一步沉淀做鋪墊。
�。�5）按比例加入冰預(yù)冷的溶液Ⅲ1。5ml（與溶液Ⅰ、Ⅱ?qū)?yīng)），輕加輕搖，冰浴10min。溶液出現(xiàn)白色絮狀沉淀。沉淀為蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物、細(xì)胞碎片和其他大分子成分。溶液Ⅲ中的HAc中和NaOH，因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間的堿性條件會(huì)打斷基因組DNA，只要是50－100 kb大小的片斷，就不能再被PDS共沉淀。同時(shí)變性的質(zhì)粒DNA復(fù)性。反應(yīng)形成的高鹽環(huán)境進(jìn)一步加速了沉淀。
（6）12000rpm離心15min，白色沉淀聚集在離心管一側(cè)，用移液槍將上清液轉(zhuǎn)移到另一潔凈的離心管中。然后向上清液中加入1/10體積的3MNaAc混勻，加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會(huì)起任何化學(xué)反應(yīng)，對(duì)DNA很安全，因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在，當(dāng)加入乙醇時(shí)，乙醇會(huì)奪去DNA周圍的水分子，使DNA失水而易于聚合。在pH為8左右的溶液中，DNA分子是帶負(fù)電荷的，加一定濃度的NaAc或NaCl，易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀。
�。�7） 以12000rpm離心15min，小心倒去上清液，得到DNA沉淀。加入3ml70%冰乙醇，輕輕地覆蓋沉淀，不打散沉淀，洗滌一次。
�。�8）以12000rpm離心5min，離心管底部DNA沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。去掉上清液，將離心管上沉淀部位做好標(biāo)記，將離心管倒置于吸水紙上，干燥5min。粗提取的質(zhì)粒呈淺黃色，隨著水分的減少質(zhì)粒變?yōu)闊o色。所以為了完全溶解質(zhì)粒，要在離心管上標(biāo)記質(zhì)粒所在位置。
（9）將DNA沉淀溶于1mlTE緩沖液中，移液槍吹吸助溶，然后將溶解液轉(zhuǎn)移到一個(gè)Eppendorf管中。TE是pH緩沖液，為DNA提供穩(wěn)定的生理狀態(tài)，呈弱堿性，有利于保護(hù)堿基對(duì)。同時(shí)含有EDTA是二價(jià)陽離子的螯合劑，抑制DNA酶作用。
4、質(zhì)粒純化
（1）Eppendorf管中加入RNase A（純濃度＞50ug/ml），37℃保溫0。5—1h
（2）將上述的溶液平均分配到2個(gè)1。5ml的微量離心管中，每管0。5ml，分別加入與溶液等體積的（500ul）Tris飽和苯酚溶液，振蕩混勻，7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是經(jīng)Tris飽和后的，顯黃色。苯
酚加入后，溶液分層，苯酚向下，下層呈淺黃色，上層溶液無色，在中間產(chǎn)生大量白色沉淀，此為變性后的蛋白質(zhì)。
�。�3）加入等體積的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到到另一潔凈的Eppendorf管中。苯酚是強(qiáng)的蛋白變性劑，但是苯酚留在質(zhì)粒溶液中會(huì)影響DNA的酶切，它本身易被氧化，會(huì)損傷質(zhì)粒。氯仿也是蛋白變性劑，但是比酚弱，且能溶解質(zhì)粒中的脂類，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。異戊醇則可起消除抽提過程中出現(xiàn)的泡沫，有利于分層更明顯。此時(shí)溶液中已看不到明顯的白色沉淀，但仍有蛋白質(zhì)的存在。
（4）加入等體積的氯仿溶液，振蕩混勻， 7000rpm，離心5min，上清液轉(zhuǎn)移到一潔凈的Eppendorf管中，得上清液400ul。
�。�5）向上清液中加入1/10體積的NaAc混勻，再加入2倍體積的冰無水乙醇，混勻，—20℃下沉降30分鐘。
（6）以12000rpm，離心15min，棄去上清液，得到DNA沉淀，為白色。
（7）向DNA沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗滌。然后以12000rpm離心5min，離心管底部DNA沉淀所在面應(yīng)與收集沉淀面一致。
�。�8）去掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，室溫干燥。用50ulTE溶解于1管中。
5、質(zhì)粒檢測(cè)
�。�1）稱取0。4g的瓊脂糖，置于一錐形瓶中，在三角瓶上標(biāo)好液面位置，加入40ml的1×TAE電泳緩沖液，再加入5—10ml重蒸水，以補(bǔ)充在溶膠過程中損失的水分。然后置微波爐加熱至完全溶化，溶液透明。冷卻至50℃左右，倒入制板槽制板。
（2）待膠凝固后，小心拔起梳子，使加樣孔端置陰極段放進(jìn)電泳槽內(nèi)。在槽內(nèi)加入1×TAE 電泳緩沖液，至液面覆蓋過膠面2—3cm。取1μl加電泳載樣液和3μl質(zhì)粒樣品于小紙片上，用移液槍混勻。
�。�3）電泳1h，觀察溴酚蘭的帶（藍(lán)色）的移動(dòng)。
�。�4） 把膠槽取出，小心滑出膠塊，放進(jìn)EB溶液中進(jìn)行染色，完全浸泡約5min。
（5）凝膠成像儀觀察。
五、【注意事項(xiàng)】
�。�1）滴加溶液II時(shí)，要逐滴加入，且要輕加輕搖溶液使之混勻，整體動(dòng)作要快，因?yàn)閺?qiáng)堿在溶液中停留時(shí)間不能過長(zhǎng)，否則會(huì)破壞質(zhì)粒DNA。
�。�2）加入溶液III后，生成了大量的絮狀沉淀，溶液III中和強(qiáng)堿使質(zhì)粒復(fù)性，不可劇烈震蕩， 防止染色體DNA斷裂，應(yīng)該上下顛倒離心管，使其混勻。
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告5
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
1、學(xué)會(huì)如何使用顯微鏡觀察細(xì)胞；
2、了解細(xì)胞的結(jié)構(gòu)；
3、學(xué)會(huì)制作臨時(shí)裝片。
二、實(shí)驗(yàn)材料：（實(shí)驗(yàn)材料可換）松針、動(dòng)物血液、動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞永久裝片
三、實(shí)驗(yàn)用具： 載玻片、蓋玻片、蒸餾水、滴管、鑷子、土豆、刀片、顯微鏡（物鏡5X、10X、40X）
四、方法步驟：
1、制作松針的臨時(shí)切片：
�。�1）取干凈的載玻片一個(gè)平置于試驗(yàn)臺(tái)上，用滴管在載玻片中央滴一滴蒸餾水。
�。�2）將土豆切成條狀（截面約：0.5X0.5cm)取兩條，將一根松針夾在兩個(gè)土豆條之間，用刀片削成盡量薄的薄片，削時(shí)，手腕不動(dòng)，靠大臂帶動(dòng)小臂移動(dòng)刀片。切片數(shù)次。從中選取較薄的切片，置于載玻片的.水滴上。
�。�3）從一側(cè)輕輕蓋上蓋玻片，不要產(chǎn)生氣泡。用吸水紙輕輕吸去蓋玻片周圍的水滴，即完成臨時(shí)切片的制作。
2、觀察切片：
�。�1）取出顯微鏡，置于試驗(yàn)臺(tái)上靠左的位置，打開光源。
�。�2) 將上步制作好的切片置于顯微鏡的載物臺(tái)上，調(diào)整載物臺(tái)位置，使蓋玻片對(duì)準(zhǔn)光源。
（3）使用5X物鏡觀察切片，使松針切片在視野中心，換成10X物鏡，觀察松針葉面橫切結(jié)構(gòu)。
�。�4）換成40X物鏡觀察，注意細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)結(jié)構(gòu)，畫圖。
3、動(dòng)物血液臨時(shí)裝片的制作及觀察（除了不用切片，其他類似）
4、 動(dòng)物神經(jīng)細(xì)胞永久裝片的觀察。
五、反思：
1、松針的葉面結(jié)構(gòu)是什么樣的？
2、動(dòng)物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)是什么樣的？與植物細(xì)胞又什么不同？
3、顯微鏡的物鏡倍數(shù)愈大，視野的亮度如何？物體的大小如何？
4、如何調(diào)節(jié)焦距？
5、如何才能使切片盡量的薄？切片的厚薄對(duì)顯微鏡下觀察的效果有什么影響。
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告6
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
1、通過對(duì)原核和真核各種形態(tài)細(xì)胞的光學(xué)顯微鏡觀察，了解細(xì)胞的形態(tài)及其顯微結(jié)構(gòu)；
2、學(xué)習(xí)顯微測(cè)量的方法，對(duì)細(xì)胞的大小有一直觀認(rèn)識(shí)。
二、實(shí)驗(yàn)材料和儀器：
小白鼠肝細(xì)胞切片；雞血紅細(xì)胞；蠶豆葉片橫切片；
普通光學(xué)顯微鏡；目鏡測(cè)微尺；鏡臺(tái)測(cè)微尺；載玻片；蓋玻片。
三、實(shí)驗(yàn)步驟：
(一)細(xì)胞形態(tài)觀察
l、動(dòng)物細(xì)胞的觀察
�。�1）人肝細(xì)胞切片：在顯微鏡下仔細(xì)觀察肝細(xì)胞的形態(tài)構(gòu)造。
�。�2）雞血細(xì)胞涂片的觀察：觀察血細(xì)胞的組成；紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板的形態(tài)特點(diǎn)。
2、植物細(xì)胞的觀察
取蠶豆葉片橫切片的觀察：注意表皮細(xì)胞和葉肉細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)。
�。ǘ┘�(xì)胞的大小和測(cè)量
1、卸下目鏡的上透鏡，將目鏡測(cè)微尺刻度向下裝在目鏡的'焦平面上，再旋上目鏡的上透鏡。
2、將鏡臺(tái)測(cè)微尺刻度向上放在鏡臺(tái)上夾好，使測(cè)微尺分度位于視野中央。調(diào)焦至能看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的分度。
3、小心移動(dòng)鏡臺(tái)測(cè)微尺和轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡測(cè)微尺(如目鏡測(cè)微尺分度模糊，可轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡上透鏡進(jìn)行調(diào)焦)，使兩尺左邊的一直線重合，然后由左向右找出兩尺另一次重合的直線。
4、記錄兩條重合線間目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)。按下式計(jì)算目鏡測(cè)微尺每格等于多少μm：
鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)
目鏡測(cè)微尺每格的微米數(shù)=————————— × 10
目鏡測(cè)微尺的格數(shù)
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
1、目鏡校正：40倍顯微鏡目鏡測(cè)微尺每格的微米數(shù)=17/70=0.24
2、細(xì)胞大小的測(cè)量：
五、作業(yè)與思考：
1、血細(xì)胞按含量高低，主要含有：紅細(xì)胞，白細(xì)胞，血小板。
白細(xì)胞最大，紅細(xì)胞次之，血小板最小。紅細(xì)胞：主要的功能是運(yùn)送氧。 白細(xì)胞：主要扮演了免疫的角色，當(dāng)病菌侵入人體時(shí)，白細(xì)胞能穿過毛細(xì)血管壁，集中到病菌入侵部位，將病菌包圍，吞噬。血小板：止血過程中起著重要作用。細(xì)胞形態(tài)見下圖。
2、植物細(xì)胞一般比動(dòng)物細(xì)胞大一些。形態(tài)圖見下。
3、在不同放大倍數(shù)下，測(cè)定的細(xì)胞大小基本一致，但有一些偏差。放大倍數(shù)越大，在視野中同等實(shí)際距離下的兩點(diǎn)視野距離更大，而更容易測(cè)量準(zhǔn)確。
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告7
實(shí)驗(yàn)五比較酶和Fe3+的催化效率
考點(diǎn)提示：
(1)為何要選新鮮的肝臟?因?yàn)樵诓恍迈r的肝臟中，過氧化氫酶的活性會(huì)由于細(xì)菌的破壞而降低。
(2)該實(shí)驗(yàn)中所用試管應(yīng)選較粗的還是較細(xì)的?為什么?應(yīng)選用較粗的，因?yàn)樵谳^細(xì)的試管中容易形成大量的氣泡，而影響衛(wèi)生香的復(fù)燃。
(3)為何要選動(dòng)物的肝臟組織來做實(shí)驗(yàn)，其他動(dòng)植物的組織的研磨液能替代嗎?因?yàn)楦闻K組織中過氧化氫酶含量較豐富;其它動(dòng)植物組織也含有少量的過氧化氫酶，所以能夠替代。
(4)相同質(zhì)量的塊狀肝臟和肝臟研磨液，哪一個(gè)催化效果好?為什么?研磨液效果好;因?yàn)樗黾舆^氧化氫酶與過氧化氫的接觸面積。
(5)滴入肝臟研磨液和氯化鐵溶液時(shí)，可否共用下個(gè)吸管?為什么?不可共用，防止過氧化氫酶與氯化鐵混合，而影響實(shí)驗(yàn)效果。
實(shí)驗(yàn)六色素的提取和分離
1、原理：葉綠體中的色素能溶解在有機(jī)溶劑丙酮或無水乙醇——提取色素
各色素在層析液中的溶解度不同，隨層析液在濾紙上擴(kuò)散速度不同——分離色素
2、步驟：
(1)提取色素研磨
(2)制備濾紙條
(3)畫濾液細(xì)線：均勻，直，細(xì)，重復(fù)若干次
(4)分離色素：不能讓濾液細(xì)線觸及層析液
(5)觀察和記錄：結(jié)果濾紙條上從上到下依次為：橙黃色(胡蘿卜素)、黃色(葉黃素)、藍(lán)綠色(葉綠素a)、黃綠色(葉綠素b)。
考點(diǎn)提示：
(1)對(duì)葉片的要求?為何要去掉葉柄和粗的時(shí)脈?綠色、是深綠色。因?yàn)槿~柄和葉脈中所含色素很少。
(2)二氧化硅的作用?不加二氧化硅對(duì)實(shí)驗(yàn)有何影響?
為了使研磨充分。不加二氧化硅，會(huì)使濾液和色素帶的顏色變淺。
(3)丙酮的作用?它可用什么來替代?用水能替代嗎?
溶解色素。它可用酒精等有機(jī)溶劑來代替，但不能用水來代替，因?yàn)樯夭蝗苡谒?/p>
(4)碳酸鈣的作用?不加碳酸鈣對(duì)實(shí)驗(yàn)有何影響?
保護(hù)色素，防止在研磨時(shí)葉綠體中的色素受到破壞。不加碳酸鈣，濾液會(huì)變成黃綠色或褐色。
(5)研磨為何要迅速?要充分?過濾時(shí)為何用布不用濾紙?研磨迅速，是為了防止丙酮大量揮發(fā);只有充分研磨，才能使大量色素溶解到丙酮中來。色素不能通過濾紙，但能通過尼龍布。
(6)濾紙條為何要剪去兩角?防止兩側(cè)層析液擴(kuò)散過快。
(7)為何不能用鋼筆或圓珠筆畫線?因?yàn)殇摴P水或圓珠筆油中含有其它色素，會(huì)影響色素的分離結(jié)果。
(8)濾液細(xì)線為何要直?為何要重畫幾次?防止色素帶的重疊;增加色素量，使色素帶的顏色更深一些。
(9)濾液細(xì)線為何不能觸到層析液?防止色素溶解到層析液中。
(10)濾紙條上色素為何會(huì)分離?
由于不同的色素在層析液中的溶解度不同，因而它們隨層析液在濾紙條上的'擴(kuò)散速度就不同。
(11)色素帶最寬的是什么色素?它在層析液中的溶解度比什么色素大一些?
最寬的色素帶是葉綠素a，它的溶解度比葉綠素b大一些。
(12)濾紙條上相互間距的是哪兩種色素?胡蘿卜素和葉黃素。
(13)色素帶最窄的是第幾條色素帶?為何?
第一條色素帶，因?yàn)楹}卜素在葉綠體的四種色素中含量最少。
實(shí)驗(yàn)七觀察質(zhì)壁分離和復(fù)原
1、條件：細(xì)胞內(nèi)外溶液濃度差，活細(xì)胞，大液泡
2、材料：紫色洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞(具紫色大液泡)，質(zhì)量濃度0.3g/mL的蔗糖溶液，清水等。
3、步驟：制作洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞臨時(shí)裝片→觀察→蓋玻片一側(cè)滴蔗糖溶液，另一側(cè)用吸水紙吸引→觀察(液泡由大到小，顏色由淺變深，原生質(zhì)層與細(xì)胞壁分離)→蓋玻片一側(cè)滴清水，另一側(cè)用吸水紙吸引→觀察(質(zhì)壁分離復(fù)原)
4、結(jié)論：細(xì)胞外溶液濃度>細(xì)胞內(nèi)溶液濃度，細(xì)胞失水質(zhì)壁分離
細(xì)胞外溶液濃度<細(xì)胞內(nèi)溶液濃度，細(xì)胞吸水質(zhì)壁分離復(fù)原
知識(shí)概要：制片觀察加液觀察加水觀察
考點(diǎn)提示：
(1)洋蔥為何要選紫色的?若紫色過淡怎么辦?
紫色的洋蔥有紫色的大液泡，便于觀察液泡的大小變化;縮小光圈，使視野變暗些。
(2)洋蔥表皮應(yīng)撕還是削?為何?表皮應(yīng)撕不能削，因?yàn)橄鞯谋砥ね瘛?/p>
(3)植物細(xì)胞為何會(huì)出現(xiàn)質(zhì)壁分離?動(dòng)物細(xì)胞會(huì)嗎?當(dāng)細(xì)胞失去水分時(shí)，其原生質(zhì)層的伸縮性大于細(xì)胞壁的伸縮性;動(dòng)物細(xì)胞不會(huì)發(fā)生質(zhì)壁分離，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞沒有細(xì)胞壁。
(4)質(zhì)壁分離時(shí)，液泡大小和顏色的變化?復(fù)原時(shí)呢?
細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離時(shí)，液泡變小，紫色加深;當(dāng)細(xì)胞質(zhì)壁分離復(fù)原時(shí)，液泡變大，紫色變淺。
(5)若發(fā)生質(zhì)壁分離后的細(xì)胞，不能發(fā)生質(zhì)壁分離復(fù)原，其原因是什么?
細(xì)胞已經(jīng)死亡(可能是外界溶液濃度過大，細(xì)胞失水過多或質(zhì)壁分離時(shí)間過長(zhǎng))
(6)高倍鏡使用前，裝片如何移動(dòng)?
若要把視野中上方的物像移到視野的正中心，則要將裝片繼續(xù)向上移動(dòng)。若要把視野中左方的物像移到視野的正中心，則要將裝片繼續(xù)向左方移動(dòng)，因?yàn)轱@微鏡視野中看到的是倒像。
(7)換高倍物鏡后，怎樣使物像清晰?視野明暗度會(huì)怎樣變化?如何調(diào)亮?換高倍物鏡后，應(yīng)調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋使物像變得清晰;視野會(huì)變暗，可調(diào)大光圈或改用反光鏡的凹面鏡來使視野變亮。
(8)所用目鏡、物鏡的長(zhǎng)度與放大倍數(shù)的關(guān)系?目鏡越長(zhǎng)，放大倍數(shù)越小;物鏡越長(zhǎng)，放大倍數(shù)越大。
(9)物像清晰后，物鏡與載玻片之間的距離和放大倍數(shù)的關(guān)系?
物鏡與載玻片之間的距離越小，放大倍數(shù)越大。
(10)總放大倍數(shù)的計(jì)算方法?放大倍數(shù)具體指面積的放大倍數(shù)還是長(zhǎng)度的放大倍數(shù)?
總放大倍數(shù)等于目鏡放大倍數(shù)與物鏡放大倍數(shù)的乘積;放大倍數(shù)是指細(xì)小物體長(zhǎng)度或?qū)挾鹊姆糯蟊稊?shù)。
(11)放大倍數(shù)與視野中細(xì)胞大小、多少、視野明暗的關(guān)系?
放大倍數(shù)越大，視野中細(xì)胞越大、數(shù)目越少、視野越暗。
(12)更換目鏡，若異物消失，則異物在目鏡上;更換物鏡，若異物消失，則異物在物鏡上、移動(dòng)載玻片，若異物移動(dòng)，則異物在載玻片上。
(13)怎樣利用質(zhì)壁分離現(xiàn)象來測(cè)定植物細(xì)胞液的濃度?①配制一系列濃度從小到大的蔗糖溶液②分別用以上不同濃度的溶液制成某植物細(xì)胞的臨時(shí)裝片③用顯微鏡觀察某植物細(xì)胞是否發(fā)生質(zhì)壁分離。某植物細(xì)胞液的濃度就介于不能引起質(zhì)壁分離的濃度和能引起質(zhì)壁分離的濃度之間。
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告8
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
1、掌握顯示細(xì)胞中過氧化物酶反應(yīng)的原理和方法。
2、了解細(xì)胞凋亡的生物學(xué)意義
3、掌握凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)檢測(cè)方法
二、實(shí)驗(yàn)原理：
1、細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物，用聯(lián)苯胺處理標(biāo)本，細(xì)胞內(nèi)的過氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色的聯(lián)苯胺藍(lán)，進(jìn)而變?yōu)樽厣a(chǎn)物，因而可以根據(jù)顏色反應(yīng)來判定過氧化物酶的`有無或多少。中間產(chǎn)物藍(lán)色聯(lián)苯胺是不穩(wěn)定的，無需酶的參加即可氧化為棕色化合物。
2、細(xì)胞凋亡是指細(xì)胞在生理或病理?xiàng)l件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束其生命的過程。它是一個(gè)主動(dòng)的、高度有序的，基因控制的，一系列酶參與的過程。
3、凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮;細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細(xì)胞膜有小泡狀形成;晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體;根據(jù)細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行顯微觀察是檢測(cè)細(xì)胞凋亡的一種直觀、可靠的方法。
三、實(shí)驗(yàn)步驟：
細(xì)胞中過氧化物酶的顯示
1、在載片上滴一滴PBS緩沖液；
2、取骨髓細(xì)胞：用斷頸法處死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剝出后肢股骨，剪開股骨一端，用牙簽尖的一端插入剪開的小孔中，摳取少許骨髓細(xì)胞置滴有PBS的載片上；
3、涂片：用另一玻片將骨髓細(xì)胞沿一個(gè)方向涂布推開，室溫晾干；
4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸銅液，以蓋滿涂片為宜，處理30秒-1分鐘。
5、傾去硫酸銅液，直接滴入聯(lián)苯胺混合液反應(yīng)6分鐘（以蓋滿涂片為宜）
6、清水沖洗，番紅復(fù)染2min。
7、鏡檢：清水沖洗，室溫晾干，先低倍鏡下觀察，后換高倍鏡下觀察（油鏡100×）
細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè)與觀察吉姆薩染色:
1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細(xì)胞面朝上)
2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞
3、95%乙醇固定5min
4、PBS緩沖液洗2次
5、吉姆薩染色液染色5min
6、蒸餾水輕輕洗去染液
7、普通光學(xué)顯微鏡下觀察。
吖啶橙染色:
1、取細(xì)胞爬片置于小培養(yǎng)皿中(有細(xì)胞面朝上)
2、生理鹽水輕輕漂洗細(xì)胞
3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min
4、PBS緩沖液洗2次每次1min
5、0.01%吖啶橙染色液在避光環(huán)境下染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液
6、選用藍(lán)光激發(fā)濾片在熒光顯微鏡下觀察。
四、結(jié)果與分析：
根據(jù)隨機(jī)選擇的幾個(gè)視野的統(tǒng)計(jì)，該樣品的細(xì)胞凋亡率=227/506×100=44.9
Hela細(xì)胞凋亡過程中核染色質(zhì)的形態(tài)變化（吖啶橙染色）
五、思考題：
1、細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制
細(xì)胞凋亡是一個(gè)受基因調(diào)控、眾多細(xì)胞膜受體和胞漿蛋白參與的細(xì)胞主動(dòng)自殺過程，其觸發(fā)因素多種多樣，包括細(xì)胞內(nèi)誘導(dǎo)因子和抑制因子對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控。
2、細(xì)胞凋亡的特征
凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征是:體積變小,細(xì)胞質(zhì)濃縮;細(xì)胞核發(fā)生染色質(zhì)凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細(xì)胞膜有小泡狀形成;晚期細(xì)胞膜內(nèi)陷形成大小不同的凋亡小體。
3、研究細(xì)胞凋亡的方法
定性的研究方法：常規(guī)瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場(chǎng)倒轉(zhuǎn)瓊脂糖凝膠電泳、形態(tài)學(xué)觀察（普通光學(xué)顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡）
定量或半定量的研究方法：各種流式細(xì)胞儀方法、原位末端標(biāo)記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告9
實(shí)驗(yàn)生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的鑒定
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
初步掌握鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的基本方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
1．還原糖的鑒定原理生物組織中普遍存在的還原糖種類較多，常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內(nèi)都含有還原性基團(tuán)（游離醛基或游離酮基），因此叫做還原糖。蔗糖的分子內(nèi)沒有游離的半縮醛羥基，因此叫做非還原性糖，不具有還原性。本實(shí)驗(yàn)中，用斐林試劑只能檢驗(yàn)生物組織中還原糖存在與否，而不能鑒定非還原性糖。
斐林試劑由質(zhì)量濃度為0.1 g／mL的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為0.05g／mL的硫酸銅溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡藍(lán)色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應(yīng)式如下：
CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O
用斐林試劑鑒定還原糖時(shí)，溶液的顏色變化過程為：淺藍(lán)色棕色磚紅色(沉淀)。
2．蛋白質(zhì)的鑒定原理鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時(shí)，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑。雙縮脲試劑的成分是質(zhì)量濃度為0.1 g／mL的氫氧化鈉溶液(A)和質(zhì)量濃度為0.01 g／mL(B)的硫酸銅溶液。在堿性溶液(NaOH)中，雙縮脲(H2NOC—NH—CONH2)能與Cu2+作用，形成紫色或紫紅色的絡(luò)合物，這個(gè)反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的'肽鍵，因此，蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。
3．脂肪的鑒定原理脂肪可以被蘇丹Ⅲ染成橘黃色，被蘇丹Ⅳ 染成紅色
三、實(shí)驗(yàn)過程（見書Ｐ18）
四、實(shí)驗(yàn)用品（見書Ｐ18）
五、注意
1.關(guān)于鑒定還原糖的實(shí)驗(yàn)，在加熱試管中的溶液時(shí)，應(yīng)該用試管夾夾住試管上部，并放入盛開水的大燒杯中加熱。注意試管底部不要接觸燒杯底部，同時(shí)試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免試管內(nèi)溶液沸騰時(shí)沖出試管，造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過于沸騰，可以上提試管夾，使試管底部離開大燒杯中的開水。
2.斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后方可使用，切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。
3．蛋白質(zhì)的鑒定中先加雙縮脲A，再加雙縮脲B
六、討論
鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的根據(jù)是什么？
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告10
實(shí)驗(yàn)教師：xxx
所在學(xué)校：xxx中學(xué)
目的要求：
1練習(xí)徒手切片
2認(rèn)識(shí)葉片的結(jié)構(gòu)
3畫葉片的表皮細(xì)胞和保衛(wèi)細(xì)胞
材料用具：
新鮮葉片（如菠菜、槐樹、蠶豆的葉片），顯微鏡，雙面刀片（兩片、并在一起、一側(cè)用膠布粘牢）、鑷子、載玻片、蓋玻片、葉片的永久切片、盛有清水的培養(yǎng)皿、滴管、吸水紙、碘液、紗布、毛筆、小木板。
方法步驟
方法與步驟要點(diǎn)
注意事項(xiàng)
�。ㄒ唬┚毩�(xí)徒手切片，制作葉片橫切片的臨時(shí)切片
1將新鮮的葉片平放在小木板上。
2右手捏緊并排的兩片刀片，沿著圖中虛線的方向，迅速切割。
3把刀片夾縫中存在的切下的薄片放入盛有清水培養(yǎng)皿中。要多切幾次（每切一次，刀片要蘸一下水）。
4用毛筆蘸出最薄的一片，制成臨時(shí)切片。葉片下面要墊上小塊木板，以防損壞桌面。刀片要捏緊，切割速度要快，注意安全。
為了便于觀察，載玻片的水滴中可以同時(shí)放幾片葉的橫切片，選擇切得最薄的一片用來觀察。
�。ǘ┯^察葉片的`結(jié)構(gòu)
1．用顯微鏡先觀察葉片橫切面的臨時(shí)切片，再觀察葉片的永久橫切片。
2．觀察時(shí)注意分清時(shí)的表皮、葉肉和葉脈。
仔細(xì)觀察上、下表皮細(xì)胞的區(qū)別
（三）觀察葉片的下表皮
1．用鑷子撕下一小塊葉片的下表皮，制成臨時(shí)裝片。
2．用顯微鏡進(jìn)行觀察，下表皮細(xì)胞的形態(tài)是什么樣子的，下表皮上有沒有氣孔？
撕取下表皮時(shí)，一定要薄，否則影響觀察效果。
注意觀察氣孔的結(jié)構(gòu)。
（四）畫圖
在下面空白處畫出下表皮上一對(duì)保衛(wèi)細(xì)胞及周圍的幾個(gè)表皮細(xì)胞，這一對(duì)保衛(wèi)細(xì)胞要詳細(xì)畫，周圍的細(xì)胞只需勾出輪廓。
畫圖時(shí)，要真實(shí)、實(shí)事求是。
討論與交流
1．保衛(wèi)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)對(duì)植物的蒸騰作用有什么意義？
2．從結(jié)構(gòu)上看，葉片有哪些方面是適于接受陽光的？
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告11
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
�、睂W(xué)習(xí)并掌握動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的無菌操作技術(shù)。
�、擦私庠�(xì)胞培養(yǎng)的基本方法及操作過程。
�、硨W(xué)習(xí)細(xì)胞計(jì)數(shù)及營(yíng)養(yǎng)液的配制。
實(shí)驗(yàn)原理
�、奔�(xì)胞原代培養(yǎng)
原代細(xì)胞培養(yǎng)是指直接從動(dòng)物體內(nèi)獲取的細(xì)胞、組織和器官，經(jīng)體外培養(yǎng)后，直到第一次傳代為止。這種培養(yǎng)，首先用無菌操作的方法，從動(dòng)物體內(nèi)取出所需的組織（或器官），經(jīng)消化，分解成單個(gè)游離細(xì)胞，在人工培養(yǎng)下，使其不斷的生長(zhǎng)及繁殖。
細(xì)胞培養(yǎng)是一種操作繁瑣而又要求十分嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)技術(shù)。要使細(xì)胞能在體外長(zhǎng)期生長(zhǎng)，必須滿足兩個(gè)基本要求：一是供給細(xì)胞存活所必須的條件，如適量的水、無機(jī)鹽、氨基酸、維生素、葡萄糖及其有關(guān)的生長(zhǎng)因子、氧氣、適宜的溫度，注意外環(huán)境酸堿度與滲透壓的調(diào)節(jié)。二是嚴(yán)格控制無菌條件。
�、布�(xì)胞死活鑒定死活細(xì)胞的鑒定方法有很多種，常用的有染色法和儀器分析法。染色法是常用的細(xì)胞死活鑒定方法，簡(jiǎn)便，易于操作。不同的死活細(xì)胞鑒定方法有各自不同具體的反應(yīng)機(jī)理，但無論采用何種辦法，都是利用了死活細(xì)胞在生理機(jī)能和性質(zhì)上的差異。
染色法分化學(xué)染色法和熒光染色法，根據(jù)染色機(jī)理的不同，染料或使死細(xì)胞著色，或使活細(xì)胞著色。
死活細(xì)胞在生理機(jī)能和性質(zhì)上的差異主要包括：
☆死活細(xì)胞細(xì)胞膜通透性的差異：活細(xì)胞的細(xì)胞膜是一種選擇性膜，對(duì)細(xì)胞起保護(hù)和屏障作用，只允許物質(zhì)選擇性的通過；而細(xì)胞死亡之后，細(xì)胞膜受損，通透性增加。常用的以臺(tái)盼藍(lán)鑒別細(xì)胞死活的方法就是利用了這一性質(zhì)。臺(tái)盼藍(lán)，又稱錐藍(lán)，是一種陰離子型染料，不能透過完整的細(xì)胞膜。所以經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色后只能使死細(xì)胞著色，而活細(xì)胞不被著色。甲基藍(lán)有類似的染色機(jī)理。植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離也可鑒定死活。
☆死活細(xì)胞在代謝上的差異：是采用美藍(lán)染料鑒定酵母細(xì)胞死活的依據(jù)。美藍(lán)是一種無毒染料，氧化型為藍(lán)色，還原型為無色。由于活細(xì)胞中新陳代謝的作用，使細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，能使美藍(lán)從藍(lán)色的氧化性變?yōu)闊o色的還原型，因此美藍(lán)染色后活的酵母細(xì)胞無色；而死細(xì)胞或代謝緩慢的老細(xì)胞，則因它們的'無還原能力或還原能力極弱，使美藍(lán)處于氧化態(tài)，從而被染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。
除此之外，還有一些細(xì)胞器的專有染料。如液泡系的專有染料中性紅。中性紅是一種低毒性染料，可以使活細(xì)胞液泡著紅色，而細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不被著色；死細(xì)胞的液泡不被著色或淺染，染料彌散于整個(gè)細(xì)胞中，細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)被染成紅色。有時(shí)侯為了增加染色效果可以將兩種染料結(jié)合使用，如甲基藍(lán)-中性紅混合染色法。
實(shí)驗(yàn)用品
�、辈牧闲“资�
�、苍噭�
臺(tái)盼藍(lán)、伊紅、PBS緩沖液、細(xì)胞培養(yǎng)液（含生長(zhǎng)因子）
�、称鞑�
剪子、棉球、75%酒精、移液槍、無菌操作臺(tái)、正置光學(xué)顯微鏡、倒置光學(xué)顯微鏡、解剖盤、滴管、離心管、離心機(jī)、注射器、Eppendorf管、培養(yǎng)皿、酒精燈、塑料培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板
實(shí)驗(yàn)步驟
�、比〔�
取小鼠一只，采用斷頭法處死。清水洗小鼠浸入75%酒精中消毒3min，取出轉(zhuǎn)入超凈工作臺(tái)內(nèi)的解剖盤中，無菌操作打開腹腔，取出其脾臟，除去其周圍的脂肪組織，并用PBS液自上而下淋洗1-2次，轉(zhuǎn)入無菌培養(yǎng)皿中待用。
�、卜蛛x脾細(xì)胞
用滴管向培養(yǎng)皿中注入30滴PBS緩沖液，再用“L”型針頭注射器在皿中吸取0.2毫升PBS液注入脾臟，注射時(shí)沿長(zhǎng)軸注射。然后再用針頭在脾臟上扎眼，并用“L”型針頭輕輕刮出脾細(xì)胞。在均勻吹勻脾臟細(xì)胞。
吸取上述分離的單個(gè)脾細(xì)胞懸液，放入Eppendorf管中，使量至1mL，以1000r/min離心5min。⒊培養(yǎng)脾細(xì)胞
取塑料培養(yǎng)皿一套，用移液槍吸取培養(yǎng)液2mL加入塑料皿中，并將皿標(biāo)記待用。取離心后的Eppendorf管，棄去上清液，用移液槍（200ul）吸取塑料皿中的培養(yǎng)液400ul加入棄去上清的Eppendorf管中，用槍頭吹勻管底的脾細(xì)胞，吸取200ul脾細(xì)胞懸液接種于上述塑料皿中，混勻后放入37°C，5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
�、磁渲迫疽�
用生理鹽水配成5%臺(tái)盼藍(lán)染液，備用。⒌染色
取0.5mL細(xì)胞懸濁液放入試管中，加入1-2滴染液�；旌稀�2-5min后將細(xì)胞放在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上觀察死活情況，注意不要有
氣泡產(chǎn)生，放大倍數(shù)為10x10。染色后活細(xì)胞不著色，死細(xì)胞顯示藍(lán)色。注意染色時(shí)間不能超過15min，否則染液將細(xì)胞毒殺。
�、队�(jì)數(shù)
在10x10倍的顯微鏡下觀察，計(jì)算血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的4個(gè)4小方格的細(xì)胞數(shù)量。包括細(xì)胞總數(shù)與死細(xì)胞數(shù)量。壓線者計(jì)上不計(jì)下，計(jì)左不計(jì)右。
�、酚�(jì)算細(xì)胞活力
根據(jù)公式：細(xì)胞活力=(總細(xì)胞數(shù)-死細(xì)胞數(shù))/總細(xì)胞數(shù)×100%
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
臺(tái)盼藍(lán)染色后的細(xì)胞（10x10）伊紅染色后的細(xì)胞（10x10）
總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞數(shù)統(tǒng)計(jì)表（10×10）
項(xiàng)目自己培養(yǎng)細(xì)胞老師培養(yǎng)細(xì)胞總細(xì)胞數(shù)個(gè)/ml活細(xì)胞數(shù)個(gè)/ml細(xì)胞活力1.4×1067.5×1053.0×1055.5×10521.4%73.3%分析與討論
�、苯Y(jié)果分析
本次實(shí)驗(yàn)中我們小組自己培養(yǎng)細(xì)胞所測(cè)細(xì)胞活力為21.4%，并不算高，分析得應(yīng)有以下原因可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果（包括誤差）：
�、湃粼跓o菌操作的過程中操作不規(guī)范，導(dǎo)致染菌，會(huì)極大的影響觀察，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。
�、迫粼陔x心分離呈單細(xì)胞的過程中離心機(jī)轉(zhuǎn)速過快或時(shí)間過長(zhǎng)很可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞破裂，導(dǎo)致小鼠脾細(xì)胞大量死亡。
�、侨旧珪r(shí)間過長(zhǎng)，或觀察時(shí)間過長(zhǎng)都會(huì)導(dǎo)致染色試劑將細(xì)胞殺死，使細(xì)胞活力驟降，這是導(dǎo)致細(xì)胞活力比較低的重要原因。
�、葘�(shí)驗(yàn)中的一些操作不正確或不規(guī)范的情況、計(jì)算帶來的誤差等也會(huì)直接導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)誤差。
�、沧⒁馐马�(xiàng)
�、艊�(yán)格進(jìn)行動(dòng)物消毒，需用75%酒精消毒。
�、茋�(yán)格進(jìn)行無菌操作，防止細(xì)菌、霉菌、支原體污染，避免化學(xué)物質(zhì)污染。
�、俏∫后w前，瓶口和吸管硬行火焰消毒；吸取液體時(shí)，避免碰撞。
⑷離心管入臺(tái)前，管口、管壁應(yīng)消毒。
�、蓪�(shí)驗(yàn)者離開超凈臺(tái)時(shí)，要隨時(shí)用肘部關(guān)閉工作窗。
�、势鞑氖褂脮r(shí)既要注意用火焰消毒，又要防止?fàn)C傷、燙死細(xì)胞。
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告12
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康某醪秸莆砧b定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的基本方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
1．還原糖的鑒定原理
生物組織中普遍存在的還原糖種類較多，常見的有葡萄糖、果糖、麥芽糖。它們的分子內(nèi)都含有還原性基團(tuán)（游離醛基或游離酮基），因此叫做還原糖。蔗糖的分子內(nèi)沒有游離的半縮醛羥基，因此叫做非還原性糖，不具有還原性。本實(shí)驗(yàn)中，用斐林試劑只能檢驗(yàn)生物組織中還原糖存在與否，而不能鑒定非還原性糖。斐林試劑由質(zhì)量濃度為0.1g／mL的氫氧化鈉溶液和質(zhì)量濃度為0.05g／mL的硫酸銅溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡藍(lán)色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2與加入的葡萄糖在加熱的條件下，能夠生成磚紅色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身則氧化成葡萄糖酸。其反應(yīng)式如下：CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O用斐林試劑鑒定還原糖時(shí)，溶液的顏色變化過程為：淺藍(lán)色 棕色 磚紅色(沉淀)。
2．蛋白質(zhì)的鑒定原理
鑒定生物組織中是否含有蛋白質(zhì)時(shí)，常用雙縮脲法，使用的是雙縮脲試劑。雙縮脲試劑的成分是質(zhì)量濃度為0.1g／mL的氫氧化鈉溶液(A)和質(zhì)量濃度為0.01g／mL(B)的`硫酸銅溶液。在堿性溶液(NaOH)中，雙縮脲(H2NOC—NH—CONH2)能與Cu2+作用，形成紫色或紫紅色的絡(luò)合物，這個(gè)反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。由于蛋白質(zhì)分子中含有很多與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的肽鍵，因此，蛋白質(zhì)可與雙縮脲試劑發(fā)生顏色反應(yīng)。
3．脂肪的鑒定原理
脂肪可以被蘇丹Ⅲ染成橘黃色，被蘇丹Ⅳ染成紅色
三、實(shí)驗(yàn)過程（見書Ｐ18）
四、實(shí)驗(yàn)用品（見書Ｐ18）
五、注意
關(guān)于鑒定還原糖的實(shí)驗(yàn)，在加熱試管中的溶液時(shí)，應(yīng)該用試管夾夾住試管上部，并放入盛開水的大燒杯中加熱。注意試管底部不要接觸燒杯底部，同時(shí)試管口不要朝向?qū)嶒?yàn)者，以免試管內(nèi)溶液沸騰時(shí)沖出試管，造成燙傷。如果試管內(nèi)溶液過于沸騰，可以上提試管夾，使試管底部離開大燒杯中的開水。
2.斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后方可使用，切勿將甲液和乙液分別加入組織樣液中。
3．蛋白質(zhì)的鑒定中先加雙縮脲A，再加雙縮脲B六、討論鑒定生物組織中還原糖、脂肪、蛋白質(zhì)的根據(jù)是什么？
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告13
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
�。ㄒ唬┱莆找话闩囵B(yǎng)基的制備原理及要求，掌握培養(yǎng)基酸堿度的測(cè)定，熟悉一
般培養(yǎng)基的制備過程和各種器皿滅菌方法。
（二）掌握細(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和方法，掌握細(xì)菌抹片的制備方法和革蘭
氏染色法及油鏡的使用方法，并認(rèn)識(shí)革蘭氏染色的反應(yīng)特性。
�。ㄈ┱莆諏W(xué)習(xí)用微生物學(xué)原理診斷疾病的一般方法及步驟。
二、實(shí)驗(yàn)用品
�。ㄒ唬┢鞑�
量筒、燒杯、電子天平、漏斗、三角燒瓶、空試劑瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、ph試紙、紗布、脫脂棉、天平、電爐、試劑瓶瓶塞、扎繩、放大鏡、包裝紙、洗耳球、酒精燈、載玻片、火柴、吸水紙、剪刀、記號(hào)筆、接種環(huán)、注射器、鑷子、鉗子、毫米尺、培養(yǎng)箱、水浴培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、油鏡
�。ǘ┰噭┘安牧�
肘胨、蛋白胨、豬膽鹽、氯化鈉、瓊脂、乳糖、0.01%結(jié)晶紫水溶液、0.5%中性紅水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氫氧化鈉、鹽酸、牛血清、革蘭氏染色液、蒸餾水、小白鼠、病豬內(nèi)臟
三、實(shí)驗(yàn)步驟
（一）培養(yǎng)基的制備
�。ㄋ杏玫降钠髅蠖家�121℃高壓滅菌15~30min，傾注平板在無菌操作臺(tái)內(nèi)完成，并放在無菌操作臺(tái)內(nèi)）
1、麥康凱培養(yǎng)基
�。�1）組成：蛋白胨17g、肘胨3g、豬膽鹽5g、氯化鈉5g、瓊脂17g、乳糖
10g、0.01%結(jié)晶紫水溶液10ml、0.5%中性紅水溶液5ml、蒸餾水1000ml
�。�2）方法：將蛋白胨、肘胨、豬膽鹽和氯化鈉溶解于400ml蒸餾水中，調(diào)節(jié)
ph至7.2。將瓊脂加入600ml蒸餾水中，并加入乳糖，加熱熔化。將兩
液混合，分裝于燒瓶?jī)?nèi)，用紗布、扎繩等捆好后，121℃高壓滅菌
15~30min。待冷卻至50~ 55℃時(shí)，加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，搖勻后
傾注平板。
注：結(jié)晶紫和中性紅水溶液配好后需經(jīng)高壓滅菌。
2、血清平板
（1）組成：營(yíng)養(yǎng)瓊脂、牛血清
（2）方法：將滅菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂加熱熔化，冷卻至45~50℃時(shí)，加入牛血清，并
混勻，傾注平板。
注：不得將牛血清一并加入后再滅菌。
3、lb培養(yǎng)基
（1）組成：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g、瓊脂15g
�。�2）方法：在950ml蒸餾水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、瓊脂和氯化鈉，調(diào)節(jié)ph至7.4，加熱熔化，分裝于瓶中，用紗布、扎繩等捆好后，121℃高壓滅菌15~30min。待冷卻至50~ 55℃時(shí)，傾注平板。
4、液體培養(yǎng)基（在lb培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，裝入大試劑瓶中，不加瓊脂，不分裝）
（二）病料取材
在病豬死亡后，首先用顯微鏡檢查其末梢血液膜片中是否有炭疽桿菌存在，未發(fā)現(xiàn)，則立即用消毒的器械對(duì)其進(jìn)行生理解剖，觀察其病理特征現(xiàn)象，取出病豬的十二指腸、胃、肝臟三處的組織物，并注意組織的完整性，用儲(chǔ)物袋密封保存。
�。ㄈ┘�(xì)菌粗培養(yǎng)
1、消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好實(shí)驗(yàn)手套，再用消毒水對(duì)無菌操作臺(tái)內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對(duì)待用器械進(jìn)行火焰滅菌。
2、接種
（1）在無菌操作臺(tái)酒精燈旁打開用儲(chǔ)物袋密封保存的病料，先左手持鑷子右
手持剪刀，把病料剪出一個(gè)小口。
（2）右手持滅過菌的接種環(huán)，左手持平板，并用拇指、食指及中指將平皿揭
開約20左右，然后將接種環(huán)前端插入小口旋轉(zhuǎn)一下后，再用劃線接種的方法接種到一個(gè)血清平板上。
�。�3）用記號(hào)筆在平板底部作好日期、操作人員、部位等標(biāo)記，并將平板倒放。
以此方法，分別接種十二指腸、胃粘膜、肝臟于血清平板上，各接種2個(gè)血清平板。
3、培養(yǎng)：將接種好的血清平板倒扣放入37℃培養(yǎng)箱中，反向培養(yǎng)24小時(shí)。注：劃線接種時(shí)盡量劃開，以保證長(zhǎng)出單個(gè)菌落，且劃線時(shí)接種環(huán)應(yīng)盡量?jī)A斜，以免劃破培養(yǎng)基（后同）；待接種完畢后熄滅無菌操作臺(tái)內(nèi)酒精燈，關(guān)閉好無菌操作臺(tái)窗口，打開無菌操作臺(tái)內(nèi)的紫外燈。 。
（四）細(xì)菌純培養(yǎng)
1、菌落特征判斷
待粗培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)24小時(shí)后，取出用放大鏡觀察記錄單個(gè)小菌落的形態(tài)特征并用實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙記錄好，并在平板底部上做好觀察標(biāo)記，其形態(tài)特征包括大小、形狀、菌落邊緣、表面構(gòu)造、隆起度、濕潤(rùn)度、透明度、顏色等。
2、取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢
�。�1）取干凈的載玻片，用記號(hào)筆在其一面做好正反面標(biāo)記，再在載玻片另一
面中央滴上一小滴蒸餾水。
�。�2）將接種環(huán)在火焰上滅菌，待冷卻后，在酒精燈旁從標(biāo)記的單個(gè)小菌落中
取少許細(xì)菌置于蒸餾水中混勻（同時(shí)蓋好平板倒扣置于一旁），用接種環(huán)涂成直徑約1.5cm的菌膜，再在酒精燈火焰上方以鐘擺速度通過固定好細(xì)菌，待冷卻進(jìn)行染色。
�。�3）先滴加草酸結(jié)晶紫溶液染色1~2min，再水洗；然后滴加革蘭氏碘液溶液
染色1~2min，再水洗；隨后滴加95%的酒精脫色30~60s，再水洗；最后滴加稀釋的品紅進(jìn)行復(fù)染30~60s，再水洗；待干燥或吸水紙吸干后鏡檢。
�。�4）將干燥的載玻片放在1000倍油鏡下，滴加一滴松柏油進(jìn)行鏡檢，觀察其
形態(tài)特征，判斷細(xì)菌的'種屬。
3、細(xì)菌接種培養(yǎng)
�。�1）消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好實(shí)驗(yàn)手套，再用消毒水對(duì)
無菌操作臺(tái)內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對(duì)待用器械進(jìn)行火焰滅菌。
�。�2）接種：右手持滅過菌的接種環(huán)，左手持平板，并用拇指、食指及中指將
平皿揭開約20左右，然后將接種環(huán)插入揭開的平板口內(nèi)蘸去一下鏡檢標(biāo)記的小菌落，再用劃線接種的方法接種到一個(gè)血清平板、lb平板或麥康凱平板上。并用記號(hào)筆在平板底部作好日期、操作人員、菌種、部位等標(biāo)記，將平板倒放。
（3）將接種好的平板倒扣放入37℃培養(yǎng)箱中，反向培養(yǎng)24小時(shí)。
注：油鏡用完后應(yīng)立即清理物鏡上的松柏油；劃線接種時(shí)盡量劃開，以保證長(zhǎng)出單個(gè)菌落；待接種完畢后熄滅無菌操作臺(tái)內(nèi)酒精燈，關(guān)閉好無菌操作臺(tái)窗口，打開無菌操作臺(tái)內(nèi)的紫外燈。 。
�。ㄎ澹┚旱闹苽�
1、鏡檢：用革蘭氏染色法在1000倍油鏡下鏡檢，觀察并記錄是否為純培養(yǎng)的細(xì)菌。
2、分裝液體培養(yǎng)基：先對(duì)無菌操作臺(tái)及需要使用的器械進(jìn)行消毒滅菌，然后用鉗子揭開一個(gè)空試劑瓶，用傾倒的方法在酒精燈旁從液體培養(yǎng)基大試劑瓶中分裝于空試劑瓶?jī)?nèi)，并立即蓋上液體培養(yǎng)基大試劑瓶瓶塞。
3、接種：右手持接種環(huán)，用火焰對(duì)其進(jìn)行滅菌，待冷卻后，取出純培養(yǎng)的平板，在無菌操作臺(tái)內(nèi)酒精燈旁，蘸去少許細(xì)菌，左手傾斜液體培養(yǎng)基，將接種環(huán)，伸入液體培養(yǎng)基內(nèi)攪動(dòng)，然后取出對(duì)接種火焰環(huán)滅菌，并用滅菌的包裝紙捆綁好后，用記號(hào)筆做好相應(yīng)標(biāo)記，置于一旁。
4、培養(yǎng)搖菌：將接種好的液體培養(yǎng)基置于水浴培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。注：分裝一個(gè)培養(yǎng)基就接種一個(gè)培養(yǎng)基，不得全部分裝完后再一個(gè)一個(gè)接種。
�。┬∈笾虏⌒詫�(shí)驗(yàn)
1、保定：選擇健康的青壯年小白鼠，先用右手抓住尾巴，旋轉(zhuǎn)數(shù)周讓其眩暈，然后用左手的拇指和食指捏住兩耳及頭部皮膚，并翻轉(zhuǎn)左手，使其頭部朝下，以達(dá)到內(nèi)臟前移的目的。
2、接種：先用酒精棉球蘸取酒精對(duì)注射部位擦洗消毒，再用注射器注射吸取0.2ml菌液注射于小白鼠腹腔中。
3、觀察：將接種的小白鼠放在適宜的環(huán)境下生活，并在鼠籠處用記號(hào)筆標(biāo)記好接種時(shí)間、菌種等。
4、再培養(yǎng)鑒定：待小白鼠死亡后，對(duì)其進(jìn)行解剖，觀察其內(nèi)臟病變情況，并取肝臟直接涂在相應(yīng)培養(yǎng)基上，在適宜條件下反向培養(yǎng)24小時(shí)后，取菌落細(xì)菌進(jìn)行鏡檢觀察判斷。
注：在注射小白鼠2小時(shí)候需要觀察小白鼠是否因注射時(shí)傷害到內(nèi)臟而死亡。
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告14
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1. 學(xué)會(huì)提取和分離葉綠體中色素的方法。
2. 比較、觀察葉綠體中四種色素：理解它們的特點(diǎn)及與光合作用的關(guān)系
二、實(shí)驗(yàn)原理
光合色素主要存在于高等植物葉綠體的基粒片層上，而葉綠體中的色素能溶于有機(jī)溶劑
中。故要提取色素，要破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，破壞葉綠體膜，使基粒片層結(jié)構(gòu)直接與有機(jī)溶劑接
觸，使色素溶解在有機(jī)溶劑中。
葉綠體中的'色素有四種，不同色素在層析液(脂溶性強(qiáng)的有機(jī)溶劑)中的溶解度不同，
因而隨層析液的擴(kuò)散速度也不同。
三、材料用具
取新鮮的綠色葉片、定性濾紙、燒杯、研缽、漏斗、紗布、剪刀、小試管、培養(yǎng)皿、毛細(xì)吸管、量筒、有機(jī)溶劑、層析液(20份石油醚、2份丙酮、1份苯混合)、二氧化硅、碳酸鈣。
四、實(shí)驗(yàn)過程（見書Ｐ54）
1.提取色素：
2.制備濾紙條：
3.色素分離，紙層析法。（不要讓濾液細(xì)線觸及層析液）
4.觀察：
層析后，取出濾紙，在通風(fēng)處吹干。觀察濾紙條上出現(xiàn)色素帶的數(shù)目、顏色、位置和寬窄。結(jié)果是：4條色素帶從上而下依次是：胡蘿卜素(橙黃色)、葉黃素(黃色)、葉綠素a(藍(lán)綠色)、葉綠素b(黃綠色)。
五、討論
1.濾紙條上的濾液細(xì)線為什么不能接觸到層析液？
2．提取和分離葉綠體中色素的關(guān)鍵是什么？
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告15
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1、觀察植物細(xì)胞有絲分裂的過程，識(shí)別有絲分裂的不同時(shí)期。
2、初步掌握制作洋蔥根尖有絲分裂裝片的技能。
3、初步掌握繪制生物圖的方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
在植物體中，有絲分裂常見于根尖、莖尖等分生區(qū)細(xì)胞，高等植物細(xì)胞有絲分裂的.過
程，分為分裂間期和分裂期的前期、中期、后期、末期�？梢杂酶弑讹@微鏡觀察植物細(xì)胞的
有絲分裂的過程，根據(jù)各個(gè)時(shí)期細(xì)胞內(nèi)染色體（或染色質(zhì)）的變化情況，識(shí)別該細(xì)胞處于有
絲分裂的哪個(gè)時(shí)期，細(xì)胞核內(nèi)的染色體容易被堿性染料著色。
三、材料用具
洋蔥根尖、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、滴管、鑷子、培養(yǎng)皿、鉛筆、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的鹽酸、
體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01g/ml的龍膽紫（或紫藥水）
四、實(shí)驗(yàn)過程（見書Ｐ39）
1、洋蔥根尖的培養(yǎng)（提前3—4天）
2、解離：5min
3、漂洗：10min
4、染色：5min
5、制片
6、鏡檢
五、注意
1、解離充分是實(shí)驗(yàn)成功的必備條件。解離充分，組織才能分散，細(xì)胞也不會(huì)重疊。
2、漂洗時(shí)間一定要足夠，否則細(xì)胞染不上色。
3、染色時(shí)，染液的濃度和染色時(shí)間必須掌握好。特別是染色不能過深，否則鏡下一片紫色，無法觀察。
六、討論
1、制作好洋蔥根尖有絲分裂裝片的關(guān)鍵是什么？談?wù)勀阕约旱捏w會(huì)。
2、在觀察清楚有絲分裂各個(gè)時(shí)期的細(xì)胞以后，繪出洋蔥根尖細(xì)胞有絲分裂的簡(jiǎn)圖，并標(biāo)明時(shí)期。
【生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告】相關(guān)文章：
生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告范例15篇12-12